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■ 制品说明 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出E.coli DH5α Competent Cells。 E.coli DH5α Competent Cells在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时,利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性),通过蓝白斑方法可以很容易地鉴别重组体菌株。由于菌株无lac lq,故不需要IPTG。因此,当制作基因文库或进行亚克隆时,可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 细胞浓度 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1 - 2×109 bacteria/ml | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ Genotype | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
E.coli DH5α : F-, φ 80dlacZ ΔM15, Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi -1, gyrA96 , relA1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
-80℃。 注意: -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定,转化效率将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 质量控制 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1. 转化效率 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
转入1 ng 的pUC19,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pUC19 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2. β-半乳糖苷酶的α-互补性 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
当使用pUC19 plasmid进行转化时,含有100 μg/ml Ampicillin和60 μg/ml X-Gal的L-agar plate出现蓝色菌落。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 注意事项 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等),但效率可能会降低。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入的高纯度DNA样品不要超过10 ng。否则转化效率会降低。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时,适当调整反应条件。例如,当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时,42℃放置60秒而不是45秒。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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6. 当加入X-Gal时,按照以下操作进行: | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
·将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到 agar培养基中。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
7. DH5α可用于M13mp载体的复制。但由于其不携带F因子,因而不能形成菌斑。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。 |
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