操作步骤

（一）土壤样品处理：

1.  65℃预热裂解液I，待其沉淀溶化后充分混匀，取 0.5 mL 加入到 1.5 mL 离心管中并置于 65℃。

2.  称取 0.1-0.3 g 的土壤，加入到装有预热的裂解液I的离心管中，震荡器上剧烈震荡 5-10 min 。

注意：如样品处理量较大，可按比例增大样品处理体积，但需保证震荡充分。

3.  将离心管置于 65℃水浴中保温10 min。

（二）土壤DNA纯化：

1. 12,000 rpm 室温离心 3 min，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色取决于腐殖酸的含量，上清液的体积一般为300-400 µL）。 

2. 在上清液中加入等体积的裂解液II，上下颠倒 30 秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。

3. 将离心管冰浴至少 5 min。

4.  12,000 rpm 室温离心 3 min，转移上清到新的 1.5 mL 离心管中，上清液颜色将比上步得到的上清的颜色稍淡，体积在 0.7 mL 左右。 

5. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡 30 s混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。

6.  12,000 rpm 室温离心 3 min，小心转移0.6 mL上清到新离心管中。

（三）基因组DNA收集：

1. 在步骤（二）所得的上清中加入1.5倍体积的结合液III（0.9 mL），颠倒数次混匀后，分两次上DNA吸附柱，每次上柱后均先室温放置 2 min，然后 12,000 rpm 离心 1 min，倒掉穿透液。

2. 在吸附柱中加入500 μL洗涤液，12,000 rpm离心1 min，弃穿透液。重复洗涤一次。

3. 再将吸附柱12,000 rpm离心30 s以甩干乙醇。

4. 将吸附柱放入一个干净的1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL洗脱液（65-70℃预热），室温静置2 min。12,000 rpm离心2 min。将穿透液重新加入吸附柱中央，12,000 rpm离心1 min以洗脱更多基因组DNA。

5. 检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20ºC冰箱。