产品简介

本试剂盒在酵母质粒小提试剂盒（PE051）的基础上加以改进，增大了细胞处理量，优化了纯化步骤，节约了提取所用的时间，提高了质粒的产量和纯度。本品无需使用酚、氯仿等有毒有害试剂，整个实验操作可在1 h内完成。快速提取的质粒样品量足以满足PCR扩增，以及转化大肠杆菌。

另外，此方法提取的DNA虽无蛋白和盐污染，但是会有部分基因组DNA污染，不能通过测吸光度值来定量，仅适用于PCR和大肠杆菌转化实验。

保存温度

RT储存，未开封可保存24个月。

使用方法

常规提取（需时60 min）

一、裂解

1.用2 mL的离心管分次离心收集酵母菌液4 mL，12,000 rpm离心30 s，弃上清。

2.加入300 μL A液悬浮酵母菌体，转移至1.5 mL离心管中。加入约0.6 g玻璃珠，涡旋震荡2 min，再加入300 μL B液，继续涡旋震荡1 min。

3.置于-20 ℃冷冻10 min或-80 ℃速冻1 min，然后置于金属浴或水浴95 ℃解冻1 min。

4.12,000 rpm室温离心3 min。

二、DNA收集

1.吸取300 μL的上清液至新离心管中，加入1 mL C液（结合液），震荡混匀；分两次上DNA吸附柱，

每次上柱后均先室温放置2 min，然后12,000 rpm离心1 min，倒掉穿透液。

2. 在吸附柱中加入500 μL D液（洗涤液），12,000 rpm离心1 min，弃穿透液。

3. 再将吸附柱12,000 rpm离心30 s，甩干乙醇。

4. 将吸附柱放入一个干净的1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL E液（洗脱液，需65-70 ℃预热），室温静置2 min。12,000 rpm离心2 min。

5. 穿透液即为酵母质粒DNA，可用于PCR、转化大肠杆菌等后续实验。

快速提取（需时30 min）

一、裂解

1.用1.5-2 mL的离心管离心收集酵母菌液1.5-2 mL，12,000 rpm离心30 s，弃上清。

2.加入150 μL A液 悬浮酵母菌体，转移至1.5 mL离心管中。加入约0.3 g玻璃珠，涡旋震荡2 min，然后再加入150 μL B液，继续涡旋震荡1 min。

3.将上述离心管置于-80 ℃速冻1 min后，金属浴或者水浴加热解冻。

4.12,000 rpm室温离心3 min。

二、DNA收集

1. 吸取150 μL的上清液至新离心管中，加入500 μL C液（结合液），震荡混匀后加入到DNA吸附柱中，然后12,000 rpm离心1 min，倒掉穿透液。

2. 在吸附柱中加入300 μL D液（洗涤液），12,000 rpm离心1 min，弃穿透液。

3. 再将吸附柱12,000 rpm离心30 s，甩干乙醇。

4. 将吸附柱放入一个干净的1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL E液（洗脱液，需65-70 ℃预热），室温静置2 min。12,000 rpm离心2 min。

5. 穿透液即为酵母质粒DNA，可用于PCR、转化大肠杆菌等后续实验。

注意事项

1.D液（洗涤液）含有乙醇，易挥发，用后请您及时拧紧盖子。

2.通常酵母质粒拷贝数较低，通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计很难检测到。

3.如仅需PCR检测，可选用本公司酵母阳性克隆快速检测试剂盒（SK2421），无需提取步骤，可直接进行菌落PCR扩增。