Folin -酚试剂的配制

1．Folin-酚 A 试剂（需自备）

将 1g Na2CO3 溶于 50ml 0.2mol/L NaOH 中；再把 0.5g(硫酸铜)CuSO4·5H2O 溶于 100ml 1%的酒石酸钾钠(或酒石酸钠)溶液；然后将前者 50ml 与后者 1ml 混合，此试剂只能用一天，过期失效。

2．Folin-酚 B 试剂（SL9010）本试剂的浓度为 1mol/L，此为应用液。

操作方法

1．标准曲线的制作

取 14 支试管分成两组，分别加入 0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml 标准蛋白质溶液(250μg/ml)，用水补足到 1ml，加入 5ml 试剂甲，混匀，于 20-25℃放置 10 分钟，再加入 0.5ml 试剂乙，立即摇匀，在 20-25℃保温 30 分钟，于 500nm 处比色。测定光密度值，取两组测定的平均值，以蛋白质浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线值为定量的依据。

2. 样品测定

取 1ml 样品溶液（约合 20-250μg/多肽或蛋白质）加入 5ml A 试剂混匀，于 20-25℃放置 10 分钟，再加 0.5ml B 试剂（Folin-酚），立即摇匀，在 20-25℃保温 30 分钟，于500nm 比色，以 1ml 水代替样品作空白对照。测定后，可以在标准曲线中查出未知样品的浓度。

若用 0.5cm 光程的比色杯进行比色，可按下面方法进行操作：取 0.2ml 样品溶液（约含 5-100μg 多肽或蛋白质）加入 1ml A 试剂（可选用 0.3-0.5cm 直径的小试管）混匀，10 分钟以后，再加入 0.1ml B 试剂，立即混匀，30 分钟后比色。多肽或蛋白质的浓度在 2-25μg，测波长 755nm，而 25μg 以上则采用 500nm 比色为宜。