产品简介
GCL(glutamate cysteine ligase)是GSH合成的限速酶,GSH对GCL有反馈抑制作用。GCL基因表达受多种因素调节,如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性高低对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。
在ATP和Mg2+存在下,GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸;同时ATP去磷酸化产生无机磷分子,通过测定无机磷增加速率,即可计算出GCL活性。
溶液的配制
1、 试剂二:临用前加 6 mL 蒸馏水充分震荡溶解,用不完的试剂-20℃分装保存,禁止反复冻融;
2、 试剂三:临用前加 1.5 mL 蒸馏水充分震荡溶解;
3、 试剂五:临用前加入 12 mL 蒸馏水,充分震荡溶解后,缓缓加入 400 µL 浓硫酸(自备),边加边搅拌;
4、 标准品:1 μmol/mL磷标准溶液。临用前将标准液用蒸馏水稀释成0.1 μmol/mL磷标准溶液。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品
冷冻离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、浓硫酸和蒸馏水。
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