产品说明

该酶在75℃时可进行DNA复制，Pfu DNA聚合酶在镁存在的条件下可催化核苷酸沿5’→3’方向发生聚合反应，形成双链DNA，Pfu DNA聚合酶具有3’→ 5’外切酶校正活性。当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。本产品在所有热稳定性聚合酶中Pfu DNA聚合酶的错误几率最低，错误率约为1×10-6/每碱基对 ，缺点是PCR扩增灵敏度较Taq低。建议Pfu DNA聚合酶用于要求保真度比较高的PCR反应，引物的延伸反应以及其它一些应用，包括克隆、DNA表达、突变分析等。Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平端，无末端磷酸化。若要进行“T-A”克隆，可在PCR反应完了之后，加入Taq DNA聚合酶，于72℃反应1-2小时，以便在DNA 3’端附加一个“A”。

产品来源

为重组E.coli菌株，其基因组中含有来源于Pyrococcus furiosus的Pfu DNA polymerase基因。

产品用途

1. 基因亚克隆的PCR扩增。

2. 蛋白质表达载体的构建。

3. 突变体的制备。

活性定义

在75℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个活性单位。

质量保证

本品经PCR验证，活性测定，内切核酸酶/缺刻酶测定和SDS-PAGE纯度鉴定。保证产品的质量稳定可靠。

使用注意

除了酶活性丧失外，下列因素也可能导致扩增失败：

（1）模板太多或太少

（2）样品中存在Mg2+ 络合剂，导致Mg2+实际浓度过低

（3）PCR仪温度不准

（4）临床来源的样品中含有未知的Pfu DNA聚合酶抑制剂

（5）引物部分降解

（6）dNTP部分降解等。

建议：每50微升反应体系中，酶用量为0.5-1微升最好，酶量少可能扩增效率低下，使用时请注意！