特点

•     · 固定、稳定和纯化的完整系统
•     · 从组织中纯化高品质DNA
•     · 保持组织形态

产品详情

固定和储存于PAXgene Tissue Container的组织样本可后续经石蜡包埋，用于病原体研究和后续的DNA、RNA和/或miRNA研究时，使用PAXgene Tissue DNA Kit从固定和稳定于PAXgene Tissue Container的组织中纯化DNA，纯化基于离心柱形式的硅胶膜DNA纯化技术。配合容器，该试剂盒为分子分析提供从采样、固定和稳定到高品质DNA纯化的完整解决方案。

性能

应用PAXgene Tissue DNA Kit纯化的总DNA纯度非常高，DNA A260/A280比为1.7–1.9，同时吸光度扫描显示其在260 nm处有对称峰，证实是高纯度的基因组DNA。污染最小化，并且纯化所得DNA可直接用于下游应用，无检测到的PCR抑制。采集器和试剂盒配合使用，为分子分析提供从采样、固定和稳定到高品质DNA纯化的完整解决方案（参见"High-quality DNA from different tissue types fixed and stabilized in PAXgene Tissue Containers"）。

原理

目前传统组织学所使用的组织固定方法对分子分析的应用带来限制。含有福尔马林的固定剂与生物分子交联，修饰核酸和蛋白质。在组织固定、储存和处理过程中，交联导致核酸降解。因为无法完全去除交联，其引起的化学修饰将抑制敏感的下游应用，如定量PCR或RT-PCR。为了实现对同一样本进行分子病理检测和传统病理检测，需要一种方法在固定分子的同时保存组织形态。

PreAnalytiX研制了PAXgene Tissue System以满足这些需求。该系统包括组织采集装置（PAXgene Tissue Container用于采集、固定、储存及运输人类组织样本）以及用于纯化总RNA、DNA或miRNA的试剂盒。PAXgene Tissue Container可进行组织固定，用于组织病理学研究；也可从同一样本中纯化高纯度核酸，用于分子分析。固定和稳定方法保持了组织形态学，福尔马林固定组织中同时存在没有破坏性交联和降解的完整核酸。

为了分离基因组DNA，该体系需要应用PAXgene Tissue Containers采集和稳定组织，然后应用PAXgene Tissue DNA Kit分离和纯化DNA。

步骤

PAXgene Tissue Container是预装有2种试剂的双腔容器。PAXgene Tissue Fix组织固定液快速浸润并固定组织。组织固定后，将其从PAXgene Tissue Fix中移出，转移到同一容器中含有PAXgene Tissue Stabilizer稳定液的另外一个腔内。组织储存在PAXgene Tissue Stabilizer稳定液中，其核酸和组织形态可在室温下稳定3–7天，在2–8℃下可稳定2–4周，不同组织的保存时间不同。储存于–15–30℃时，组织形态和核酸完整性可能稳定至少26个月。

固定了的样本可包埋于石蜡中，用于组织学研究。从PAXgene Tissue固定、石蜡包埋（PFPE）的组织样本中纯化核酸可在石蜡包埋之前或之后进行。

PAXgene Tissue DNA Kit提供3种不同操作流程，用于从PAXgene Tissue Containers固定和稳定的组织中提取基因组DNA。

组织裂解在裂解缓冲液、Buffer TD1中进行，使用蛋白酶K进行消化。缓冲液条件应结合Buffer TD2和乙醇进行调整，确保提供最佳的DNA结合条件，然后将裂解液装到PAXgene DNA离心柱上。在离心过程中，DNA会选择性地结合到硅胶膜上，污染物则流过柱子。分别用洗涤缓冲液TD3和TD4进行2次有效洗涤，去除剩余的污染物和酶抑制剂，然后用低盐洗脱缓冲液Buffer TD5洗脱DNA，可即用于下游应用（参见" The PAXgene Tissue DNA procedure"）。

应用

纯化所得DNA可即用于各种下游应用，包括：

    · PCR和定量real-time PCR

    · Southern印迹

    · 药物基因组研究

    · SNP发现和SNP基因分型

参数