储存条件

制胶液和上样液短期4℃保存，长期-20℃保存，有效期1年。

产品组成

注意：过硫酸铵（APS）为固体粉末，使用前配制成10% APS溶液（0.1 g APS加1mL双蒸水）。APS溶液最好现配现用，通常4℃可保存一周，-20℃能保存半年。

操作步骤

一、胶制备尿素-PAGE 胶

1．计算灌胶所需制胶液体积。

2. 按照每100 mL的6%尿素-PAGE制胶液中加入10%的APS溶液0.5 mL，TEMED 0.1 mL（冬季可以将APS和TEMED各增加50%-100%，以加速凝胶）的比例配置PAGE胶灌胶液。

3．将配置好的灌胶液倒入胶板，在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。

4. 室温聚合 30-60 分钟（低温抑制聚合反应，故最好室温）。

5. 待胶凝固后拔出梳子，用 0.5×TBE 液冲洗加样孔。

二、样品处理

对一般样品、测序样品、微卫星 DNA、AFLP 样品、DDRT 样品、RPA 样品：将样品跟上样液 1:1 混合，95℃ 3 分钟变性，然后放冰上待用；对 TGGE 样品：可以直接上样。

三、电泳

1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够 0.5×TEB 电泳液。

2．预电泳 5-30 分钟后，将冰上放置的样品上样。

3.  连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率（固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制）。对小胶一般用 5-6W 固定功率，大胶用 15-25W 固定功率。

4. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理（如银染）。注意：如果银染，必须延长固定时间以便洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。

注意事项

1. APS溶液不稳定，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换10% APS。

2. PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作。

3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4. 丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。

附表：（单位：尿素g，其余为mL）

6% 的尿素-PAGE胶成分：

1L 包含（420g 尿素，40% 19:1的丙烯酰胺 150mL，10×TBE 50mL，补水到1000mL）