产品介绍

Bis-Tris-SDS-PAGE凝胶电泳的成本虽高于普通的Tris-甘氨酸-SDS-PAG电泳体系，但是可以得到清晰笔直的条带。Bis-Tris-SDS-PAGE 凝胶同样适用于6-400kD的蛋白电泳；电泳体系呈酸性，抑制半胱氨酸的二次氧化，防止二硫键在凝胶中交联；缓冲体系中加入抗氧化剂，整个电泳过程都在还原条件下进行，有效防止二硫键的形成；小分子蛋白迁移速度慢，不易跑出凝胶，避免丢失小片段蛋白；利用LDS上样缓冲液的高pH值可以最大程度防止天冬氨酰-脯氨酰的裂解从而保证蛋白的完整性。

产品组成

(可制备8%的1.5mm厚的mini胶50块)

注意：过硫酸铵（APS）为结晶性粉末，2-8 ℃储存，使用前每支加入1 mL蒸馏水即为10% APS溶液，现配现用最佳，溶液用后-20 ℃可储存2个月。APS如出现严重结块应弃用。

操作步骤

（以1.5mm厚mini胶为例；0.75mm厚mini胶用量减半）

一、灌制分离胶

1．参照凝胶模具说明书，装配好模具。

2．取相应体积的32% Acr-Bis、3.5×Bis-Tris 凝胶缓冲液和双蒸水（参照表1）在小烧杯或试管中混合。

3．加入10% APS溶液和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．注入模具（留少许以判断凝胶状态），避免产生气泡，凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约1.5 cm或距梳齿0.5 cm，轻轻加入1 mL水覆盖封胶，使分离胶表面保持平整。

5．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

二、灌制浓缩胶

1．倒掉覆盖在分离胶上的水层。

2．将相应体积的32% Acr-Bis、3.5×Bis-Tris 凝胶缓冲液和双蒸水（参照表2）在一个小烧杯或试管中混合。

3．加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面（留少许以判断凝胶状态），避免产生气泡，直至前玻璃板的顶端。

5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6．静置30-60分钟，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。

7．进行常规电泳操作。参照说明书SK6013L以及SK6013H进行电泳。

注意事项

1. APS溶液常温不稳定，取用后立即放回-20 ℃冰箱；若发现凝胶时间延长，应更换APS溶液。

2. PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；可通过增加APS及TEMED的用量，加快PAGE凝胶的聚合速度，但凝胶聚合过快不利于操作。

3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。

5. 丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。