PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit

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品名：PrimeScript™ II High Fidelity RT-PCR Kit
品牌：TaKaRa
货号：R023

货号：R023

品牌：TaKaRa

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SKU	包装规格	单位	目录价	您的价格	库存	数量	购物车
R023A	50 Rxns	EA	¥1516.00	请登录	请登录
R023B (A × 4)	50 Rxns × 4	EA	¥5456.00	请登录	请登录

■ 制品内容 (Code No.: RR023A : 100次量*1)

BcaBEST Polymerase (22 U/μl)	50 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl)	25 μl
Random 9 mers (50 μM)	50 μl
Oligo dT Primer (50 μM)	50 μl
RNase Free dH2O	1 ml
Bca-Optimized Taq (5 U/μl)	25 μl
2 × Bca lst Buffer	1.25 ml × 2 支
5 × Bca 2nd Buffer	800 μl
dNTP Mixture (各10 mM)	50 μl
MgSO4 (25 mM)	500 μl
Control F-1 Primer*2 (20 μM)	25 μl
Control R-1 Primer*3 (20 μM)	25 μl
Positive Control RNA (2 × 105 copies/μl)	25 μl

1 反转录反应10 μl，PCR反应体系50 μl，可使用100次。 2 Positive Control RNA用上游引物。 *3 Positive Control RNA用下游引物。

■ 制品说明

PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
本试剂盒含有从RNA反转录到cDNA以及扩增此cDNA所必需的全部试剂，即用Bacillus caldotenax来源的BcaBEST Polymerase从RNA合成cDNA，然后在同一试管内加入应用LA PCR技术研制的Bca-Optimized Taq扩增此cDNA。此外，使用BcaBEST Polymerase进行反转录反应的最适温度是65℃，所以对具有复杂二级结构的RNA特别适合。

■ 各种引物的序列

引物名称	各引物序列
Random 9 mers	5′-NNNNNNNNN-3′
Oligo dT Primer	包含Takara特别设计的dT区域。本序列与TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver.3.0（Code No. RR019A/B）及TaKaRa RNA LA PCR Kit（AMV）Ver.1.1（Code No. RR012A）中的Oligo dT-Adaptor Primer的序列不同，没有M13 Primer M4区域。
Control F-1 Primer	5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer	5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′

■ 试剂盒的原理

BcaBEST RNA PCR的原理图

■ 试剂盒特点

RNA模板	适用于所有RNA (对富含GC的mRNA及具有复杂二级结构的mRNA特别有效)
扩增片段大小	5 kb以下
反转录酶	BcaBEST Polymerase (最适温度65℃)
DNA聚合酶	Bca-Optimized Taq
RNase Inhibitor	必须使用 (试剂盒中含有)
合成cDNA第一条链的引物	Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特异性下游PCR Primer 可供选择
操作	在同一反应管中进行 (反转录酶在进行PCR反应前须进行高温失活)

暂无产品信息

暂无参考文献

操作方法

反转录反应中引物的选择、RNA样品的制备、操作注意事项

标准操作流程

实验案例

人培养细胞HL60株来源的total RNA为模板的RT-PCR

含有复杂结构的目的基因的扩增