产品简介
本酶在以ATP作辅酶的情况下，可以催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基之间的连接反应。平末端和粘性末端均可，此酶也可以催化双链RNA与双链DNA连接，但不能催化单链核酸的连接。

储存条件
T4 DNA连接酶和10×T4 DNA ligase Buffer必须放置于-20℃保存，避免反复冻融，10×T4 DNA ligase Buffer建议分装使用。

活性单位定义

1 个 Weiss 活性单位是指在 ATP-PPi 交换反应中，37°C、20 分钟内将 1nmol [32PPi]转换为 Norit可吸收形式所需的酶量。1 个 Weiss 单位相当于约 200个粘性末端连接单位。1 个粘性末端连接单位：20μl反应体系(50 mM Tris-HClpH7.5), 10 mM MgCl2, 10mM DTT, 1 mM ATP, 25 µg/ml BSA, 0.12 µM(300 ug/ml)的 5’DNA 末 端)中，在 16°C、30 分钟内 50%连接 HindIII 酶切的 Lambda DNA 产物所需要的酶量。

使用示例

1．先将 10×T4 DNA ligase Buffer 在冰上融化，并进行短暂的离心。

2. 以 10μl 连接体系示例，在微量离心管中加入以下各种成分：

3. 16℃连接过夜。

4. 将 3－5μl 连接产物转化至 100μl 感受态细胞中。

注意

1. 载体 DNA 和连接片段的摩尔比：对于不同的载体和 DNA 片段，要取得成功的连接，应分别建立具有不同摩尔数比例的连接反应。在大多数情况下，DNA 片段的摩尔数应控制在载体 DNA 摩尔数的 3～10 倍。

2. 10×T4 DNA ligase Buffer 中含 ATP，为避免ATP 的降解，建议解冻后的 10×T4 DNA ligaseBuffer 分装成小包装并在-20℃保存。

3. 平末端的载体与 DNA 片断连接时，应首先对载体进行去磷酸化，以防止载体自身环化。注意：如果向连接反应体系中加入 PEG 可以促进钝末端的连接，但 PEG 可能导致 cDNA 片段克隆产物出现串联体并抑制包装反应。