产品简介

Coolaber动物组织细胞RNA提取试剂盒基于Trizol的方法，适用于常规动物组织细胞样品的总RNA提取。纯化好的总RNA可用于mRNA分离，RT-PCR，Northern杂交等下游分子实验。

不适用于骨骼以及软骨等特殊样品的RNA提取，此类样品建议使用骨组织RNA提取试剂盒（Cat：RE641）。

自备试剂

氯仿

操作步骤

（一）样品处理：

1. 贴壁细胞：吸尽培养液，在每 10 cm2 细胞中加入 1 mL 的裂解液 。用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解并且让基因组 DNA 充分断裂。

2. 培养细胞： 每1-5×106 细胞沉淀，加入1mL 的裂解液。用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解并且让基因组 DNA 充分断裂。

3. 新鲜组织：每50-100mg 的组织样品液氮研磨成粉后加入1 mL 的裂解液，或者直接加入1 mL 的裂解液用匀浆器充分研磨。震荡30 s。

（二）样品纯化：

1. 将裂解物转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中，然后加入 0.2 倍体积的自备氯仿(1 mL裂解液需 0.2mL 氯仿)，振荡器上充分振荡混匀 30 s。 

2. 12,000rpm 室温离心 3 min，吸取上清到新的离心管中，建议取900 uL上清。 

3. 在上清中加入900 uL 的RNA结合液，颠倒混匀，分多次加入同一个RNA纯化柱中（如有絮状物或沉淀产生，一并加入纯化柱中）。12,000rpm离心1min，弃穿透液。

4.在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液，室温12,000rpm离心30 s，弃穿透液；重复洗涤一次。

（三）RNA收集：

1.将结合有RNA的纯化柱12,000rpm 离心 1min，甩干乙醇。

2. 弃收集管，将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中，加入30-50uL RNA溶解液，室温放置 1 min，12,000 rpm离心1 min 洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者 -80℃ 存放。

3. 如果要提高 RNA 产量，加入30-50uLRNA溶解液重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高 RNA 浓度，使用第一次的洗脱液加回到纯化柱中重复洗脱。

注意：建议RNA用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的28S和18S条带，以及中间弥散的mRNA条带，其中28S条带是18S条带亮度的1.5-2倍。有时还包括跑在最前面的较暗的5S条带。A260/A280 比值1.8~2.0对应RNA纯度90-100%之间。