血液RNA样品保存液

货号:RE1041
品牌:Coolaber
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RE1041-500mL 500 mL ¥798.00 请登录 请登录

产品简介

由于血液富含 RNase,因此血液 RNA(主要是白细胞 RNA)非常容易降解,是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。

本产品能快速渗透到新鲜抗凝血液中的有核细胞内(主要是白细胞),抑制 RNA分子的降解。保存的血液白细胞 RNA 常温可放置 3 天,4℃可放置 5 天,-20℃可放置 3 个月。

适用于人新鲜血和哺乳动物白细胞,不适用于陈旧血液和冻凝血液,也不适用于禽类血液和其他动物血液。

 

操作说明

一、白细胞的分离和保存 

1、本产品保存全血的效果不好,故不建议用于全血的保存。必须先分离白细胞。 

2、室温 1500-2000 g 离心新鲜血液 10-15 分钟,最上层为血浆,最下层为红细胞,中间层为膜状的、含白细胞的 Buffy Coat(含白细胞多的血液此层可能很厚)。 

3、吸出血浆后,小心将中间的白细胞层吸出(允许污染少量红细胞),按 0.5 mL 白细胞加入到 2.5 mL(5 倍体积)的本产品的比例,将两者混合。

4、如此保存的白细胞可以在常温(不超过 30℃)下放置 3 天,4℃可放置 5 天。如果需要-20℃放置,需要先在 4℃放置 1 天,然后在 13000 g 室温离心 3 分钟,小心吸出浅粉红色的上清液,再将没有液体保存液的白细胞沉淀放置在-20℃,如此可放置 3 个月。不能直接将有液体保存液的白细胞悬浮液放置在-20℃,否则凝固形成的冰晶将会刺破白细胞膜,在凝固的冰晶融化时,白细胞胞浆成分(含 RNA)会进入上清,在离心时丢失,离心得到的只是细胞残骸。

5、使用时,对 4℃或以上温度保存的白细胞,将 1.5 mL 本产品和白细胞的混合物转移到离心管中,13000 g 室温离心 3 分钟。小心吸出浅粉红色的上清液,沉淀为白细胞,直接用于 RNA 提取。如果是在-20℃保存的已经按上步方法处理的白细胞沉淀,则直接用于 RNA 提取。

 

二、RNA提取

1、建议使用 Trizol 或类似 Trizol 产品提取。

2、需要注意的是在加入异丙醇沉淀 RNA 时,本产品处理的样品由于盐离子浓度高会出现两层(即两相,正常样品会出现 RNA 沉淀,不会出现两层),小心去除上清,然后加入相当于下层体积 2 倍的 50%的异丙醇,颠倒混匀后 13000 g 室温离心 10 分钟,RNA 将沉淀在管底。再按 Trizol 的标准操作流程用 75%乙醇洗涤沉淀即可。

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