产品简介

本试剂盒用于酵母质粒的小量提取实验，提取过程无需酶解，无需使用酚、氯仿等有毒有害试剂。本试剂盒使用传统沉淀法纯化，耗时稍长（整个提取过程约需3 h），但可获得较高的产率。对于大片段质粒（＞10 Kb），与市场常规吸附柱纯化方法相比，损耗率较低。由于酵母质粒拷贝数极低，提取所得质粒，无法通过分光光度计或电泳检测。适用于PCR检测或者转化大肠杆菌的实验。

保存温度

RT储存，未开封可保存24个月。

准备工作

预先在C液中加入注明量的无水乙醇，颠倒混匀后置于-20 ℃或冰上待用；在D液中加入注明量的无水乙醇待用。

操作步骤

裂解酵母

1.用离心管收集1.5 mL过夜培养好的酵母菌液，12,000 rpm离心30 sec，弃上清；

2.用100 μL A液悬浮酵母菌体，加入0.2 g玻璃珠；涡旋震荡5 min，然后再加入100 μL A液，继续涡旋震荡1-2 min；

3.在100 ℃水浴或金属浴上保温3-5 min后迅速置于冰上冷却；

4.12,000 rpm于4 ℃离心10 min。

质粒纯化

1.吸取100 μL的上清液至新离心管中，加入50 μL B液，-20 ℃放置1 h；

2. 12,000 rpm于4 ℃离心10 min，吸取上清液100 μL到新的离心管中；

3. 上述上清液中加入2倍体积的预冷C液（确定已经加入无水乙醇），迅速颠倒混匀，置于冰上15 min，12,000 rpm于4 ℃离心10 min。

4. 小心吸弃上清，避免触及沉淀；在沉淀中加入1 ml的D液（确定已经加入无水乙醇），以12,000 rpm于4 ℃离心3 min；

5. 吸弃上清液，沉淀在室温干燥后，加入20-50 μL的ddH20溶解沉淀；

6. 所得产物可用于PCR，转化大肠杆菌等后续实验。

注意事项

1.C液和D液加入乙醇易挥发，用后及时拧紧盖子。

2.通常酵母质粒拷贝数较低，通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计很难检测到。

3.通过此方法提取的酵母质粒1-5 μL可用做PCR反应的模板或者用于转化大肠杆菌。