产品简介

Ultra HiFidelity PCR KitⅡ是一种新型高保真PCR扩增预混液。适用于PCR相关的克隆和检测。扩增预混液中的Ultra HiFi DNA PolymeraseⅡ是通过定向分子进化技术开发得到的新型超强高保真DNA聚合酶，相比于Ultra HiFi DNA Polymerase，它有更强的3’- 5’外切酶活性（Proofreading活性），提高了DNA扩增过程中的真实性；同时，增强了该酶对模板的亲和力，提升了酶的灵敏度和延伸能力。上述两方面的改良，使得新酶在PCR扩增成功率和长片段扩增方面得到了加强，从而提高了本产品的扩增和后续克隆的效率。此外，本产品中的DNA聚合酶具有热启动（Hot Start）功能，可有效的控制低温情况下的非特异扩增和酶活损耗，进而保证了PCR扩增的特异性和稳定性。

产品特点

■ 高保真性：为Taq聚合酶的180倍。

■ 模板普适性：能够识别GC含量30%~80%的不同物种DNA片段。

■ 延伸力强：可扩增长至20 kb的DNA片段。

■ 高灵敏度：基因组模板用量可低至1 ng。

■ 操作简便：只需加入模板和引物，轻松配好体系，PCR产物平末端，纯化后可直接用于无缝克隆。

适用范围

用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、基因组点突变的分析（SNP）等。

储存条件

-30~-15℃保存一年。

实验结果

1. 扩增普适性

使用不同高保真酶分别扩增不同来源、不同长度的片段。结果显示，KP213在扩增能力、特异性、普适性、长片段扩增效率方面的综合性能表现优秀

A: TIANGEN KP213; B: TY 公司高保真酶；C: K 公司高保真酶。模板上样量：基因组DNA，200 ng; λ DNA, 50 ng。
M: TIANGEN D15000 Marker。1: 0.75 kb; 2: 1 kb; 3: 2 kb; 4: 3.9 kb; 5: 6 kb; 6: 0.48 kb (GC 75%); 7: 1.5 kb (GC 71%); 8: 2 kb; 9: 8.2 kb; 10: 2.3 kb; 11: 2 kb; 12: 3 kb; 13: 8.2 kb; 14: 8.1 kb; 15: 15 kb。

2. 高低GC模板适用性

使用KP213分别扩增 GC含量低(30%~35%)和高(65%~79%)的基因序列，都得到了特异的扩增产物，说明该酶对高低GC模板具有广泛的兼容性。

M: TIANGEN DNA Marker Ⅳ。
1: 0.4 kb, GC 75%; 2: 0.7 kb, GC 30%; 3: 1.1 kb, GC 79%; 4: 1.5 kb, GC 71%; 5: 1.9 kb, GC 72%; 6: 2.4 kb, GC 35%; 7: 3.9 kb, GC 70%; 8: 4.1 kb, GC 65%。

3. 大片段扩增

普通的高保真DNA聚合酶对大片段扩增存在一定困难，而KP213对大片段具有优秀的扩增能力。

M: TIANGEN D15000 Marker。 1-4: 模板为水稻基因组DNA; 5-7: 模板为水稻cDNA。
1: 8.3 kb; 2: 13.3 kb; 3: 13.9 kb; 4: 16.5 kb; 5: 5.3 kb; 6: 6.5 kb; 7: 12.9 kb。

4. 灵敏度

采用KP213以人类或者水稻基因组不同浓度DNA为模板分别扩增不同的基因片段，低至1ng的模板扩增产物清晰可见

M: TIANGEN D15000 Marker。1：模板量200 ng; 2:模板量100 ng; 3:模板量10 ng; 4:模板量5 ng; 5:模板量1 ng。

5. 保真性
采用KP213和市场主流产品扩增4kb DNA片段（35个循环），产物用TIANGEN PCR-free建库试剂盒进行建库，illumina平台测1G数据量，后续根据各产品扩增碱基突变率得出产品的保真性。TIANGEN KP213保真性可达Taq酶的180倍。