经典酵母转化试剂盒(冻存型)

货号:SK2400
品牌:Coolaber
英文名:Frozen Yeast Transformation Kit
存储条件:RT&-20℃
有效期:2年
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SK2400-200T 200 T ¥698.00 请登录 请登录

产品说明

Coolaber出品的经典酵母转化试剂盒主要用于酿酒酵母质粒转化实验,该试剂盒遵循广大用户的使用习惯,分别提供PEG、LiAc和Carrier DNA溶液,PEG、LiAc均经过滤除菌,Carrier DNA经特殊优化处理,更有助于提高质粒DNA的转化效率。该试剂盒可根据实际需要灵活配制1 × LiAc溶液和转化预混液,既方便使用,又经济实惠。

 

储存条件

Carrier DNA -20 ℃保存,其它组分可室温保存,未开封有效期24个月。

 

感受态细胞制备

1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线,30 ℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线,30 ℃培养2-4天。

3.待酵母单菌落长至直径2 mm时,把酵母细胞接种到3 mL YPDA液体培养基中,30 ℃过夜培养。

4.第二天转接到含有30-50 mL YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养,待OD600达到0.4-0.5,3000 rpm离心5 min,弃上清。

5.沉淀用30-50 mL的无菌的去离子水悬浮。3000 rpm离心5 min,弃上清。

6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc(150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL无菌水)重悬后转移至1.5 mL离心管中,3000 rpm离心5 min,弃上清。

注意:10 × LiAc Solution经过pH缓冲,无需添加TE作为缓冲剂。

7.加入1 mL 1 × LiAc重悬,小体积转化按照每管100 μL分装,用于文库转化不分装。

8.3000 rpm离心5 min,弃上清,感受态细胞即制备完毕。

注意:制备好的感受态最好立即使用,在第8步离心前,室温放置不应超过5小时。

 

转化预混液配制:

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酵母质粒转化:

1.将360 μL预混液加入1支感受态细胞中,反复吹吸沉淀,使酵母细胞彻底悬浮于预混液中。

2.30 ℃的水浴锅中孵育30 min,每10 min混匀一次。

3.(加入20 μL DMSO,可选)42 ℃的水浴锅中热击30 min,每10 min混匀一次。

4.12000 rpm离心15 s,弃上清液。

5.(可选步骤)用1 mL YPD Plus Liquid Medium重新悬浮,30℃摇床震荡培养30-60 min。12000 rpm离心15 s,弃上清液。

6.加入0.1-1 mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬沉淀,涂筛选培养基平板,30 ℃培养2-4天。

 

酵母文库转化:(需用15-50 mL离心管)

1. 将2520 μL预混液加入到感受态细胞(未分装)沉淀中,震荡使感受态细胞充分重悬。

2. 放置在30 ℃的水浴锅中孵育50 min,每10 min混匀一次。

3.(加入160 μL DMSO,可选)放置在42 ℃的水浴锅中热击30 min,每10 min混匀一次。

4. 3000 rpm离心5 min,弃上清液。

5.(可选步骤)用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30 ℃摇床震荡培养90 min,3000 rpm离心5min,弃上清液。

6.加入15 mL无菌去离子水或0.9% 氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选培养基平板(50个平板左右),30 ℃培养2-4天。

 

注意事项

1.转化全程需无菌操作。

2.初次使用Carrier DNA,请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min,然后立即放在冰上,用后-20℃储存备用。下次使用前在冰上解冻Carrier DNA。反复冻融3-5次后需重新变性Carrier DNA。

3.PEG溶液在低温环境下会析出,请于常温环境下完全溶解后使用。

4. 根据质粒浓度增减体积,增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。

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