产品简介

本产品无需使用酚、氯仿等有毒有害试剂，单个实验操作可在1小时内完成。

本试剂盒提取的酵母质粒适用于PCR和转化E.coli等实验。

酵母质粒拷贝数极低，不可通过电泳或者分光光度计定量。

产品内容

操作步骤

1. 溶解酶解液。将酶解液置于 37℃溶解(未用完的酶解液可以置于 4℃保存一周，或者-20℃长期保存)。

2. 收集菌体。在 2 mL 离心管中，分次收集 2-5 mL 过夜培养的酵母菌液，12000 rpm 室温离心 1 min，弃 上清，保留菌体沉淀。

3. 菌体重悬与酶解。向菌体沉淀中加入 200 μL 的酶解液，重悬菌体，37℃摇床(200-250 rpm)孵育 30 min。

4. 在上述酶解产物中，加入 800 μL 一步法提取液，吹打或者震荡混匀。

5. 1,2000 rpm 室温离心 2 min。小心吸取上清至纯化柱中，室温静置 2 min，1,2000 rpm 室温离心 1 min，弃 穿透液。

6. 向吸附柱中加入 700 μL 洗涤液，12,000 rpm 室温离心 1 min。

7. 将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm 室温离心 2 min。

8. 将吸附柱转移至新的 1.5 mL 离心管中。向吸附柱中央加入 30 - 50 μL 洗脱液(65-70℃预热)，室温静置 2 min。12,000 rpm 室温离心 1 min。

9. 穿透液即为酵母质粒 DNA，取 5 μL 用于 50 μL 体系的 PCR 反应，或用于大肠杆菌转化等后续实验。