产品简介

Hoechst 33258 为非嵌入性荧光染料。它们在活细胞中 DNA 聚 AT 序列富集区域的小沟处与 DNA 结合。活细胞或固定细胞均可从低浓度溶液中 摄取该染料。从而使细胞核着色。故又把此类染料称为 DNA 探针。Hoechst 33258 可溶于水并在水溶液中保持稳定。 Hoechst-DNA 的激发和发射波长分别 350nm 和 460nm。在荧光显微镜紫外光激发时， Hoechst-DNA 发出亮蓝色荧光。

使用方法 

1.对于固定的细胞或组织

1) 固定后细胞或组织样品，适当洗涤去除固定剂。如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33258 染色。 

2) 贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258 染色液，覆盖样品即可。悬浮细胞，至少加入 3 倍于待染色样品体积的染色液，混匀。室温放置 3-5 分钟。 

3) 吸除 Hoechst 33258 染色液，用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次，每次 3-5 分钟。 

4) 直接或封片后在荧光显微镜下观察。会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

 2. 对于活细胞或组织： 

1) 加入适量 Hoechst 33258 染色液，必须覆盖待染色的样品。通常六孔板单孔需加 1ml 染色液，96 孔板单孔需加 100μl 染色液。 

2) 在适宜温度下培养细胞 20～30 分钟。 

3) 弃染色液，用 PBS 或合适的缓冲液洗细胞两次。

4) 直接或封片后在荧光显微镜下观察。

注意事项

 1. 荧光染料易淬灭，建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。

 2. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液（SL1840）。

3. Hoechst 33258 对人体有害，请注意适当防护。请穿实验服并戴一次性手套操作。