产品说明

GUS能与4-MUG反应产生荧光物质4-MU。4-MU的激发波长为365 nm，发射波长为456 nm。其含量可由荧光分光光度计测出。因此，我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量的检测GUS的含量。

荧光分光光度计测定的是相对值，因此用荧光分光光度计测定时必须用标准物4-MU进行校准。

产品储存

-20 ℃保存，一年有效。

使用方法

一、植物总蛋白提取

1.取新鲜的植物组织100 mg左右，用液氮将材料急速冷冻，然后采用液氮研磨的方式在研钵里磨碎组织。如果无法不立即研磨，可以先将液氮冷冻处理的植物组织储存于-80 ℃冰箱。

2.将研磨破碎的组织转到EP管里，并立即加入1 mL的提取液，充分混匀。

3.12 000 rpm，4 ℃离心10 min。

4.将上清转至另一洁净的EP管，12,000 rpm，4 ℃离心10 min。

5.所得上清即为蛋白提取物，可以置于冰上待用，或者-80 ℃保存。

二、蛋白浓度的测定（Bradford法）

参照本公司产品Bradford蛋白浓度测定试剂盒（SK1060）。

三、标准溶液配制

用终止液稀释4-MU，建议稀释至浓度1-10μM，即为标准液（避光放置）。用于标准曲线绘制。

四、GUS表达水平的定量测定

1.在3个1 mL的离心管中分别加入900 μL的终止液，置于37 ℃温浴。

2.取150 μL蛋白提取物，加入150 μL 4-MUG底物液，37 ℃温浴，即为反应液。

3.分别在10 min，20 min，30 min时，从上述反应体系中，取100 μL加入步骤1中温浴的900 μL终止液中，避光放置直至测量结束。

4.用标准液的荧光值校准反应液中生成的4-MU的荧光值。

5.计算GUS的活性MU/min/μg总蛋白。