产品简介

pLB零背景快速克隆试剂盒（不含MCS）是一种阳性选择克隆系统，可以高效克隆各种PCR产物和任何具有平末端或粘性末端的DNA片段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的DNA片段都有效。阳性选择载体和插入片段连接仅需5 min即可获得超过95%的阳性重组克隆。由具有校正活性的聚合酶（如：Pfu Polymerase）扩增的平末端PCR产物可直接连入克隆载体。由无校正活性的聚合酶（如：Taq Polymerase）或聚合酶混合物扩增的PCR产物在连接前需用试剂盒提供的热稳定DNA平端化酶进行末端平端化（7 min）即可。连接产物可直接转化常用的大肠杆菌菌株。

试剂盒提供一个新颖的即用型阳性选择克隆载体pLB-simple Vector。该载体含有致死基因，克隆位点处插入外源片段会引起基因失活，因此只有转化了重组质粒的细菌才能存活形成克隆菌落。而自身环化的pLB-simple Vector表达致死毒性蛋白（无外源片段插入），转化后杀死大肠杆菌细胞。这种阳性筛选策略无需蓝白斑筛选，极大地加速了克隆筛选进程。

产品特点

■ 方便：自连致死的零背景载体，无需蓝白斑筛选

■ 快速：独特连接体系，5 分钟快速连接≤ 3 kb 片段

■ 高效：菌落数多，阳性率接近100%

■ 灵敏：可实现浓度低至 0.05 pmol 及长至 8 kb 片段的高效连接

■ 普适：包含高效平端化酶，平 / 粘末端产物均可连接

自备试剂

感受态细胞，氨苄青霉素

克隆位点图谱

平/ 粘末端连接流程

实验结果

不同长度片段连接菌液检测结果图
连接不同大小片段的阳性率检测。700 bp 片段加入量为12.5 ng，2 kb 片段加入量为23 ng，4 kb 片段加入量为100 ng，8 kb 片段加入量为300 ng。
M: TIANGEN Marker III

平末端长片段连接——菌落数
平末端长片段连接菌落数。连接体系中，载体加入1 μl(35 ng)，片段与载体的摩尔比7:1。≤ 3 kb 片段，室温(22℃ ) 连接5min；＞ 3 kb 片段，室温(22℃) 连接30 min。* 百分数代表菌斑检测的阳性率。

粘末端 低浓度片段连接——菌落数
粘末端低浓度片段连接菌落数。连接体系中，700 bp 片段加入量12.5 ng，2 kb 片段加入量23 ng，片段与载体的摩尔比1:1，室温(22 ℃ )连接5 min。* 百分数代表菌斑检测的阳性率。