产品说明
伊文斯蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝,分子式C34H24N6Na4O14S4 ,分子量为 960.80,CAS 号为 314-13-6。
伊文斯蓝与台盼蓝都是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞因有外排功能而无法被伊文斯兰染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞,但无法区分死亡与坏死。
保存
常温保存,避光,保质期 2 年。
使用说明
(一)血脑屏障通透性
1、 取处理后的实验动物(以小鼠为例),静脉注射伊文斯蓝染色液,小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5~1h 后处死小鼠,取目的脑组织。
2、 脑组织置于1.5mL离心管中,加入1mL PBS, 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,离心。
3、 取上清,加入等量三氯乙酸,4℃孵育。该步骤亦可采用如下操作: 取上清,按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮,室温孵育 24h。
4、 离心15min。
5、 取上述溶液,用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知不同梯度的标准伊文斯蓝的 OD 值,绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测样品的伊文斯蓝含量。
(二)活细胞染色
1、取 100μL 重悬细胞到离心管内,加入 100μL 伊文斯蓝染色液轻轻混匀染色(染色时间可适当延 长,但不宜超过10min)。
2、吸取少量经过染色后的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量,每个细胞样品至少数 500 个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。
细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率=(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100%
注意事项
1、 Evans Blue Stain 对人体有轻微毒性,请小心防护。
2、 细胞染色时,注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。
3、 血脑屏障通透性实验中,Evans Blue Stain 注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。
4、 最好采用低温冷冻离心机进行离心。
5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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