产品简介
乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A,是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰辅酶A、ADP和无机磷,钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质,通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
溶液的配制
1.试剂二:临用前将试剂二 B、试剂二 C 倒入试剂二 A,充分溶解待用;可分装后-20℃保存,避免反复冻融;
2.试剂三:临用前加入 6 mL 双蒸水,充分溶解待用;可分装后-20℃保存,避免反复冻融;
3.试剂四:临用前加入 15 mL 双蒸水,溶解后 4℃保存一周;
4.试剂五:临用前加入 15 mL 双蒸水,溶解后 4℃保存一周;
5.标准品:10 μmol/mL 标准磷贮备液;
6.提取液的配制:按提取液一:提取液二=990:10(V:V)的比例配制,根据样本量现配现用,禁止将提取液二一次性全部加入提取液一混匀分装待用;
7.工作液(定磷剂)的配制:按 H2O:试剂四:试剂五:试剂六=2:1:1:1 的比例配制,配好的工作液应为浅黄色;若变色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,工作液应现配现用
注意:配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、天平、低温离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、水浴锅、蒸馏水、冰盒、EP管。
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