产品说明
为重组E. coli菌株,其基因组中含有来源于Thermusaquaticus YTI中克隆的Taq DNA polymerase基因。本产品是一种热稳定性酶,分子量大约为94kDa。它与天然Tag DNA聚合酶有相同的功能。在Mg2+存在的条件下可催化核苷酸沿5’→3’方向发生聚合反应,形成双链DNA;同时它还具有5’ →3’外切酶活性。使用本品扩增得到的PCR产物的3´端附有一个"A"碱基,因此可直接克隆于T-Vector中。
产品内容
活性定义
在74℃条件下,30分钟内催化10nmol 的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为一个活性单位。
贮存条件
20 mM Tris-HCl( pH 8.0,25℃),100 mM KCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,0.5% NP-40 ,0.5% Tween -20 ,50%Glycerol
反应条件
50mM KCl, 10 mM Tris-HCl (Ph8.6,25℃), 0.1% Triton X-100 ,1.5mM MgCl2.
质量保证
本品经PCR验证,活性测定,内切核酸酶/缺刻酶测定和SDS-PAGE纯度鉴定。保证产品的质量稳定可靠。
使用注意
除了酶活性丧失外,下列因素也可能导致扩增失败:
(1) 模板太多或太少;
(2) 样品中存在Mg2+ 络合剂,导致Mg2+实际浓度过低;
(3) PCR仪温度不准;
(4) 临床来源的样品中含有未知的Taq酶抑制剂;
(5) 引物部分降解;
(6) dNTP部分降解;
(7) Taq酶用量太大等。
建议:每50微升反应体系中,酶用量为0.5-1微升最好,酶量少可能扩增效率低下,使用时请注意!
用途
1) 常规PCR鉴定。
2) 小片段目标基因克隆(推荐小于500bp)。
3) 标记DNA 3’-末端。
4) 平端PCR产物加“A”。
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