产品货号 | AR0095 |
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产品名称 | SDS裂解液 |
产品说明 | SDS裂解液是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western,ChIP等。 SDS裂解液的主要成分为50mM Tris (PH 8.1),1% SDS,以及焦磷酸钠,β-甘油磷酸,正钒酸钠,氟化钠,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。 |
使用说明 | 对于培养细胞样品: 1.完全融解SDS裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。 2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。 初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。 注意:低温裂解的时候,裂解液中的SDS会析出,此时可以不做任何处理,待裂解时间快到了的时候,可以预留1-2分钟,将裂解液置于室温,等SDS完全溶解后再离心。 3.充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。 对于组织样品: 1.把组织剪切成细小的碎片。 注意:低温裂解的时候,裂解液中的SDS会析出,此时可以不做任何处理,待裂解时间快到了的时候,可以预留1-2分钟,将裂解液置于室温,等SDS完全溶解后再离心。 5.充分裂解后,将裂解液转入离心管,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。 |
注意事项 | 1.为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。 3.需自备PMSF。 4.用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到的样品的蛋白浓度。 5.裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。若透明胶状物不能离心下来,则可以通过超声处理该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。 |
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