产品简介
本产品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可有效的减少人为误差。适用于高保真PCR反应、复杂模板如GC含量高(>60%),有二级结构等的扩增和大规模基因检测。
产品特点
■ 显著提高PCR 反应的特异性和灵敏度,还能有效扩增GC 含量高、二级结构等复杂模板。可扩增低至2个拷贝的目的模板,使实验结果更加精确。
■ 独创的Pfu MasterMix 配方使整个反应体系非常稳定,多次冻融或长期放于4℃亦不会影响活性。
■ 稳定高效预配好的PCR混合液快速简便,大大降低劳动强度和取样误差,而且加入了高性能的PCR增强剂和优化剂,降低了对PCR 条件的要求。
■ 分成含染料和不含染料两种体系。含染料的MasterMix 产品在PCR结束后可以直接电泳,无需加入上样缓冲液。
产品稳定性
一管便捷式PCR MasterMix系列所有产品在-20℃条件下可保存一年以上,多次冻融或长期放于4℃不影响活性。4℃放置三个月,无明显活性改变。
活性定义
1 单位 (U) Pfu DNA Polymerase 活力定义为在 74℃、30 min 内,以活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板 / 引物,将 10 nmol 脱氧 核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制检查
SDS-PAGE 检测纯度大于 99%;经检测无外源核酸酶活性;PCR 方法检测无宿主残余 DNA;能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。
适用范围
用于 DNA 的高保真扩增,如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析(SNP)和末端补平等。
主要技术参数
有 3’-5’外切核酸酶活性,无 5’-3’外切核酸酶活性,DNA 扩增时延伸速度低于 Taq 酶,一般情况下 Pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5-1 kb。Pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好,对于 GC 含量很高的模板,变性温度可以提高到 98℃,对 Pfu 酶的活性无影响。其PCR 产物为平端,可加 A 处理再与 TA 载体连接或使用平末端克隆载体。
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