产品说明
本产品通过使用玻璃珠震荡法破壁结合化学法破碎酵母细胞壁,适用于多种酵母菌的培养物(包括菌液或平板菌落)。提取液不含蛋白变性剂,提取过程无需高温处理,提取的总蛋白可用于蛋白活性检测相关实验。该试剂盒提取的蛋白可以用Bradford定量试剂盒(SK1060)或BCA定量试剂盒(SK1070)进行蛋白定量。
产品内容
储存条件
RT,未开封有效期24个月。
准备步骤
将洗涤液和提取液置于冰上预冷。
操作步骤(小提):
1.5,000 rmp,4 ℃离心5 min,收集酵母菌液(1-5mL)细胞沉淀(酵母菌液OD值0.5-2.0)。
2.加入1 mL预冷的洗涤液,震荡混匀。5,000 rmp,4 ℃离心5 min沉淀酵母细胞,弃上清。
3.用100 μL预冷提取液悬浮酵母细胞,并快速转移到1.5 mL塑料离心管中。
4.加入0.05 g的玻璃珠,在旋涡震荡器上剧烈震荡混合5-10 min(间歇冰浴冷却)。
5.用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。
6.再加入100 μL预冷提取液到剩余的玻璃珠中,稍加震荡,再次回收提取液。
7.合并两次所得提取液即为酵母总蛋白样品。
8.(可选步骤)12,000 rmp,4 ℃离心15 min,上清含可溶性蛋白质,沉淀含不溶性蛋白质。
9.提取总蛋白样品直接用于后续活性检测实验或-80 ℃保存备用。
操作步骤(大提):
1.5,000 rmp,4 ℃离心5 min,收集酵母菌液(100-500mL)细胞沉淀(酵母菌液OD值0.5-2.0)。
2.加入50 mL预冷的洗涤液,震荡混匀。5,000 rmp,4 ℃离心5 min沉淀酵母细胞,弃上清。重复洗涤一次。
3.用10 mL预冷提取液悬浮酵母细胞,并快速转移到50 mL塑料离心管中。
4.加入5 g的玻璃珠,在旋涡震荡器上剧烈震荡混合5-10 min(期间可以将样品置于-80冰箱速冻5min后继续震荡,可以提高裂解效率)。
5.用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。
6.再加入10 mL预冷提取液到剩余的玻璃珠中,稍加震荡,再次回收提取液。
7.合并两次所得提取液即为酵母总蛋白样品。
8.(可选步骤)12,000 rmp,4 ℃离心15 min,上清含可溶性蛋白质,沉淀含不溶性蛋白质。
9. 提取总蛋白样品直接用于后续活性检测实验或-80 ℃保存备用。
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