产品说明

本产品通过使用玻璃珠震荡法破壁结合化学法破碎酵母细胞壁，适用于多种酵母菌的培养物（包括菌液或平板菌落）。提取液不含蛋白变性剂，提取过程无需高温处理，提取的总蛋白可用于蛋白活性检测相关实验。该试剂盒提取的蛋白可以用Bradford定量试剂盒（SK1060）或BCA定量试剂盒（SK1070）进行蛋白定量。

产品内容

储存条件

RT，未开封有效期24个月。

准备步骤

将洗涤液和提取液置于冰上预冷。

操作步骤（小提）：

1.5,000 rmp，4 ℃离心5 min，收集酵母菌液（1-5mL）细胞沉淀（酵母菌液OD值0.5-2.0）。

2.加入1 mL预冷的洗涤液，震荡混匀。5,000 rmp，4 ℃离心5 min沉淀酵母细胞，弃上清。

3.用100 μL预冷提取液悬浮酵母细胞，并快速转移到1.5 mL塑料离心管中。

4.加入0.05 g的玻璃珠，在旋涡震荡器上剧烈震荡混合5-10 min（间歇冰浴冷却）。

5.用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。

6.再加入100 μL预冷提取液到剩余的玻璃珠中，稍加震荡，再次回收提取液。

7.合并两次所得提取液即为酵母总蛋白样品。

8.（可选步骤）12,000 rmp，4 ℃离心15 min，上清含可溶性蛋白质，沉淀含不溶性蛋白质。

9.提取总蛋白样品直接用于后续活性检测实验或-80 ℃保存备用。

操作步骤（大提）：

1.5,000 rmp，4 ℃离心5 min，收集酵母菌液（100-500mL）细胞沉淀（酵母菌液OD值0.5-2.0）。

2.加入50 mL预冷的洗涤液，震荡混匀。5,000 rmp，4 ℃离心5 min沉淀酵母细胞，弃上清。重复洗涤一次。

3.用10 mL预冷提取液悬浮酵母细胞，并快速转移到50 mL塑料离心管中。

4.加入5 g的玻璃珠，在旋涡震荡器上剧烈震荡混合5-10 min（期间可以将样品置于-80冰箱速冻5min后继续震荡，可以提高裂解效率）。

5.用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。

6.再加入10 mL预冷提取液到剩余的玻璃珠中，稍加震荡，再次回收提取液。

7.合并两次所得提取液即为酵母总蛋白样品。

8.（可选步骤）12,000 rmp，4 ℃离心15 min，上清含可溶性蛋白质，沉淀含不溶性蛋白质。

9. 提取总蛋白样品直接用于后续活性检测实验或-80 ℃保存备用。