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| ■ 制品说明 | |||||||||||||||||||||
| Takara公司在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E. coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells，当用1 ng pUC19转化100 μl细胞时，转化效率＞1×106 cfu/μg。 E.coli HST04 dam-/dcm-是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株，使DNA不被甲基化。使用本菌株转化所得到的质粒，可以被对dam、dcm甲基化敏感的限制酶切割。 另外，dam、recA双重突变的菌株是致死的，本菌株为recA+菌株。因此，易与带有同源序列的外源DNA发生重组。本制品只适用于转化已经构筑好的质粒, 而不适用于常规的克隆转化。 | |||||||||||||||||||||
| ■ 细胞浓度 | |||||||||||||||||||||
| 1-2×109 bacteria/ml | |||||||||||||||||||||
| ■ Genotype | |||||||||||||||||||||
| E. coli HST04 dam-/dcm-： F-, ara, △(lac-proAB) [Φ80dlacZ△M15], rpsL( str), thi, △(mrr-hsdRMS-mcrBC), △mcrA, dam, dcm | |||||||||||||||||||||
| ■ 保存 | |||||||||||||||||||||
| -80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。 | |||||||||||||||||||||
| ■ 质量标准 | |||||||||||||||||||||
| 转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。 转化效率 : >1 x 106 colonies/μg pUC19 plasmid | |||||||||||||||||||||
| ■ 注意事项 | |||||||||||||||||||||
| 1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 | |||||||||||||||||||||
| 2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。 | |||||||||||||||||||||
| 3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度质粒DNA不要超过10 ng。否则转化效率会降低。 | |||||||||||||||||||||
| 4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。 | |||||||||||||||||||||
| 5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基，转化效率可能会降低。 | |||||||||||||||||||||
| ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。 | |||||||||||||||||||||
| ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MaSO4·7H2O，用1 N KOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。 | |||||||||||||||||||||
| ·L-plates： 10 g Tryptone，5 g Yeast extract，5 g NaCl/1 L water, 使用1 N NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，使体系终体积为1 L，高压灭菌。 | |||||||||||||||||||||
| 6. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。 | |||||||||||||||||||||
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