产品简介
糖原磷酸化酶是糖原分解代谢中的关键酶,催化糖原的磷酸化反应。该酶分为有活性的糖原磷酸化酶 a (Glycogen phosphorylase a, GPa)和无活性的糖原磷酸化酶 b(Glycogen phosphorylase b, GPb)两种形式。糖原 的分解主要在糖原磷酸化酶 a 的催化下进行。未添加激活剂时,糖原磷酸化酶 a 催化糖原和无机磷产生葡萄糖残 基生成糖原和 1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化 NADP 还原生成 NADPH, 在 340nm下测定 NADPH上升速率,即可反映糖原磷酸化酶 a活性。添加激活剂测定 GP(GPa和 GPb)总活性, 未添加激活剂时测定 GPa 活性,GP 活性-GPa 活性得到 GPb 活性。 在 340nm 下测定 NADPH 上升速率,即可反映糖原磷酸化酶 a 活性。
溶液的配制
1、 试剂二:临用前加入 1.25 mL 蒸馏水,充分混匀;2-8℃保存 2 个月;
2、 试剂三:临用前加入 1.25 mL 蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存 4 周,避免反复冻融;
3、 试剂四:临用前加入 1.25mL 蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存 4 周,避免反复冻融;
4、 试剂五:临用前每支加入 1 mL 蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存 4 周,避免反复冻融;
5、 试剂六:临用前每支加入 1 mL 蒸馏水,充分混匀;可分装后-20℃保存 4 周,避免反复冻融;
6、 试剂七:临用前加入 4 mL 蒸馏水,充分混匀后-20 分装保存 4 周,避免反复冻融;
7、 工作液的配制:临用前根据实验所需用量,按照试剂一:试剂二:试剂三:试剂四 =740μL: 20μL: 20μL: 20μL(1T 的量)的比例,充分混匀,现用现配。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、电子天平、可调式移液器、研钵/匀浆器、1 mL 石英比 色皿、冰和蒸馏水。
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