产品简介
己糖激酶(Hexokinase, HK )(EC 2.7.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是葡萄糖分解过 程中的第一个关键酶,催化葡萄糖转为 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。
HK 催化葡萄糖合成 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADPH,NADPH 在 340nm 有特征吸收峰。
自备的仪器和用品
紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 30mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁 止反复冻融;
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4 度保存;
试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存,临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存, 禁止反复冻融;
试剂五:粉剂×1 支,-20℃保存,临用前加入 2mL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分装后-20℃保存, 禁止反复冻融;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存,临用前加入 250μL 试剂一和 250μL 蒸馏水充分溶解备用;用不完的试剂分 装后-20℃保存,禁止反复冻融。
注意事项
1、如果一次性测定样本数较多,可将试剂一、二、三、四、五和六按照比例配成混合液,预热 10min。
2、不同匀浆组织中的 HK 活力不一样,做正式实验之前请做 1-2 只预试,若△A>0.5,则说明组织活力太高, 必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液(计算公式中乘以相应稀释倍数),或缩短反应时间至 2min,使△A<0.5,以提高检测灵敏度。
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