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■ 制品说明 | |||||||||||||||||||||
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出具有很高转化效率的E. coli HST08 Premium Competent Cells。另外,E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA (这些基因是大肠杆菌切除外源甲基化DNA所必需的基因) 缺失的菌株,这使得其可广泛应用于甲基化质粒的制备、基因文库的制作以及亚克隆。当和较大质粒一起使用时,也可维持较高转化效率和菌落生长率*。10 kb以上长片段DNA克隆和基因文库构建时,可与TaKaRa DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用,效果很好。 *:与其他相同基因型的感受态细胞相比较。 对于pUC系列质粒,可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性,在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选,以筛选阳性克隆。 X-Gal:5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside | |||||||||||||||||||||
■ 细胞浓度 | |||||||||||||||||||||
1-2×109 bacteria/ml | |||||||||||||||||||||
■ Genotype | |||||||||||||||||||||
E. coli HST08 Premium: F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ- | |||||||||||||||||||||
■ 保存 | |||||||||||||||||||||
-80℃。 注意: 如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。 | |||||||||||||||||||||
■ 质量标准 | |||||||||||||||||||||
[1] 转化效率 转入1 ng 的pUC19 plasmid,涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid [2] β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 DNA时,含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。 | |||||||||||||||||||||
■ 注意事项 | |||||||||||||||||||||
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 | |||||||||||||||||||||
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等),但效率可能会降低。 | |||||||||||||||||||||
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。 | |||||||||||||||||||||
4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时,适当调整反应条件。例如,当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时,42℃放置60秒而不是45秒。 | |||||||||||||||||||||
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基,转化效率可能会降低。 | |||||||||||||||||||||
·L-broth:10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl,用1 N NaOH调整pH到7.5,使体系终体积为1 L,高压灭菌。 | |||||||||||||||||||||
·φ b-broth:5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O,用1 N KOH调整pH到7.5,使体系终体积为1 L,高压灭菌。 | |||||||||||||||||||||
·L-plates: 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl,用1 N NaOH调整pH到7.5,添加agar到1.5%,使体系终体积为1 L,高压灭菌。 | |||||||||||||||||||||
6. 当使用X-Gal 时,按照以下操作进行: | |||||||||||||||||||||
将20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。 | |||||||||||||||||||||
7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。 | |||||||||||||||||||||
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