产品简介

1.本产品适用于从昆虫、节肢动物、蛔虫和扁形虫等富含多糖的动物组织中提取基因组DNA。

2.昆虫种类较多，其处理难易程度和DNA产率各不相同，所有试验需先做预实验，再批量提取DNA。

3.本产品适用于新鲜、冷冻或固定液中保存的样品。

储存条件

常温保存，保质期1年；Proteinase K -20℃保存。

自备试剂

氯仿，2 mL 离心管。

操作步骤

（一）样品处理：

1. 65 ℃预热裂解液I，待其沉淀溶解后充分混匀，取1 mL裂解液I加入到2 mL离心管中并置于65 ℃环境（金属浴或水浴）。

2. 液氮研磨昆虫样品，将0.2-0.4 g样品加入到装有裂解液I的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10 min。

3. 加入10 µL的Proteinase K，上下颠倒30 S充分混匀，65 ℃保温1 h，期间震荡2-3次。

注意：如样品处理量较大，可按比例增大样品和提取液，要保证震荡充分。对于柔软而微量组织，可以不经过研磨，用研磨杵捣碎后加入裂解液处理。

（二）DNA纯化：

1. 12,000 rpm室温离心3 min，将上清液约800 µL转移到新的离心管中。

2. 在上清液中加入500 µL的裂解液II，震荡器上震荡30 S充分混匀，溶液将呈白色或其他颜色混浊状。

3. 12,000 rpm室温离心3 min，转移上清到新的离心管中。

4. 加入0.3 mL的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30 S混匀。

5. 12,000 rpm室温离心3 min，小心转移0.6 mL上清到新离心管中。

（三）基因组DNA收集：

1. 在步骤（二）所得的上清中加入1.2 mL结合液III（上清体积的2倍，可根据样品样增减），颠倒数次混匀后，分两次上DNA吸附柱，每次上柱后均先室温放置2 min，然后12,000 rpm离心1 min，倒掉穿透液。

2. 在吸附柱中加入500 μL洗涤液，12,000 rpm离心1 min，弃穿透液。重复洗涤一次。

3. 再将吸附柱12,000 rpm离心1 min以甩干乙醇（空管离心）。

4. 将吸附柱放入一个干净的1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL洗脱液（65-70 ℃预热），室温静置2 min。12,000 rpm离心2 min。将穿透液重新加入吸附柱中央，12,000 rpm离心1 min以洗脱更多基因组DNA。

5. 检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20 ℃冰箱。