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特点
- · 结合能力提高3倍（至多9 mg蛋白/ml树脂）
- · 高度适合于从真核和原核表达系统中纯化蛋白
- · 可在任何液相层析系统上实现自动纯化
- · 几乎不影响蛋白结构、功能和免疫能力
产品详情
小的Strep-tag II（WSHPQFEK）可用于通过Strep-Tactin树脂纯化有活性、天然构象的高纯度蛋白。此外，结合His标签可以进行标准的两步纯化操作流程。Strep-Tactin可结合磁珠进行小规模纯化操作流程（至多100 μg）或结合Superflow色谱层析树脂进行大规模纯化（至多9 mg/ml树脂）。Strep-Tactin树脂还提供预装柱产品，用于在液相色谱层析体系上进行自动纯化。
性能
Strep-Tactin Superflow Plus可高效纯化蛋白。同时，可用pQE TriSystem His·Strep TriSystem Vectors表达带有His-和Strep-tag双标签的蛋白，进行两步纯化操作流程。串联的Ni-NTA和Strep-Tactin纯化步骤标准化且十分快速，可获得超纯度蛋白。
原理
Strep-tagged蛋白能高亲和力和特异性地结合到由链亲和素工程改造的Strep-Tactin上。漂洗过后，蛋白可由低浓度的生物素（链亲和素的天然配体）或脱硫生物素（稳定、可逆结合的生物素类似物）洗脱下来（参见下图）。可在原核和真核体系中高效、标准地纯化带有小的Strep-tag II标签蛋白，得到高纯度蛋白。另外，当其他标签可能不适用时，可选用Strep-Tag II体系，例如EDTA等缓冲液添加剂会IMAC柱金属离子脱落。
操作流程
使用pQE TriSystem Vector表达Strep-tagged蛋白，采用Strep-Tactin Superflow Plus亲和纯化操作流程从细胞裂解液中得到高纯度蛋白。可使用批量或重力流方法纯化Strep-tagged蛋白，或在FPLC兼容柱中装入Strep-Tactin Superflow Plus，可在液相色谱层析系统上纯化。Strep-Tactin Superflow Plus有1 ml和5 ml预装柱两种规格，可在液相色谱层析系统上自动纯化，如FPLC、ÄkTA和BioLogic体系，或使用注射器进行手动纯化。与Strep-Tactin树脂兼容的试剂，参见与Strep-tag Strep-Tactin相互作用兼容的试剂。
| 非离子去垢剂 | 离子和两性离子去垢剂 | 还原剂 | 其他 | 盐 |
|---|---|---|---|---|
| 2% Triton X-100 | 2% N-lauryl sarcosine | 50 mM DTT | 25% glycerol | 5 M sodium chloride |
| 2% Tween 20 | 0.1% SDS | 2 M ammonium chloride | ||
| 2% N-octyl-β-D-glucopyranoside | 1.3% N-octyl-2-hydroxy-ethylsulfoxide | 1 M calcium chloride | ||
| 0.2% N-nonyl-β-D-glucopyranoside | 0.3% CHAPS | |||
| 2% Igepol CA-630 (Nonidet P40) | 0.1% N-dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide | 1 M guanidine | ||
| 0.12% C10E5; decylpentaoxyethylene | 0.034% DDAO;N-decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide | 1 mM phenylmethyl-sulfonyl fluoride (PMSF) | ||
| 0.03% C10 E6 | 10% ethanol | |||
| 0.005% C12 E8 | ||||
| 0.023% C12E9; dodecyl nonooxyethylene (Thesit) | ||||
| 0.35% DM; decyl-β-D-maltoside | ||||
| 0.007% LM; N-dodecyl-β-D-maltoside |
标签位于C端可确保只有全长蛋白被纯化。纯化操作流程具有高度可重复性，确保每次制备都得到同样高品质蛋白。在免疫检测步骤中，可用Strep-tag抗体对Strep-tagged蛋白进行高灵敏度和特异性的检测。
应用
Strep-Tactin Superflow Plus可用于高效、可重复地纯化至多9 mg Strep-tagged蛋白/ml树脂。纯化得到的蛋白可用于：
- · 功能或相互作用研究
- · 晶体筛选
- · 结构分析
- · 制备抗体
参数
| Features | Specifications |
| Applications | Proteomics |
| Binding capacity | up to 9 mg/ml |
| Scale | Strep-Tactin Superflow Plus: Large Scale; Strep-Tactin Superflow Plus Cartridge: medium scale |
| Tag | Strep-tag |
| Support/matrix | Superflow Plus |
| Yield | up to 9 mg/ml |
| Processing | manual/automated |
| Start material | cell lysates |
| N- or C-terminal tag | Both |
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