特点

    · 所有组织总RNA的高产率

    · 快速非酶法去除基因组DNA

    · 简化的QIAzol裂解和RNeasy 96纯化

    · 纯净、高质量的RNA，无苯酚污染

    · 适用于所有下游应用的高性能RNA

产品详情

RNeasy 96 Universal Tissue Kit集成了快速、方便的RNA纯化和有效消除基因组DNA。优化的方案能够从任何类型的组织中纯化高质量的RNA，甚至是难以溶解的组织。该试剂盒包括用于溶解脂肪组织和其他类型组织的 QIAzol Lysis Reagent ，以及用于纯化高质量RNA的RNeasy旋转柱。RNeasy Plus Universal Mini Kit 可在QIAcube Connect上实现自动化。

RNeasy 96 Universal Tissue Kit能够从任何组织中以96孔格式纯化总RNA。组织在 QIAzol Lysis Reagent 中高效裂解和均质化，并使用硅胶膜RNeasy 96板纯化高质量RNA。使用QIAGEN离心机4-16KS和QIAvac 96真空歧管（可选）进行手动净化。在BioRobot通用系统上使用相关的RNeasy 96 Universal Tissue 8000试剂盒进行自动纯化。使用Allprotect Tissue Reagent 可以方便地稳定组织样本，并使用TissueLyser II有效破坏组织样本。使用RNAprotect Tissue Reagent 可以稳定非脂肪组织。

性能

RNeasy Plus通用程序允许从任何类型的组织中获得高、可重复的RNA产量，包括脂肪组织和难以溶解的组织（见表“使用RNeasy Plus通用微型试剂盒的总RNA典型产量”）。产量可能因物种和发育阶段等因素而有所不同，尤其是脂肪组织。

RNeasy Plus Universal Kits总RNA的典型产量

通过实时RT-PCR和QIAxcel系统对纯化的RNA进行分析，证明了高质量的RNA具有良好的完整性（见图“高质量RNA”）。gDNA去除剂溶液和RNeasy技术可有效去除大部分基因组DNA污染，无需DNA酶处理（见图“有效去除基因组DNA”）。

与标准硅胶膜程序相比，RNeasy 96系统为所有组织类型提供了更高的总RNA产量（见表“使用RNeasy 96Universal tissue Kit的典型总RNA产量”）。

使用RNeasy 96Universal tissue Kit的典型总RNA产量

通过冷冻或室温下用RNAprotect稳定，可以从保存的组织中分离出高质量的RNA（见图“大鼠肝脏和肌肉组织的高质量总RNA”）。从难以溶解的纤维和脂肪组织中纯化的完整RNA适用于下游应用（见图“来自皮肤/脂肪/肝脏/肠组织的高质量RNA”和“来自大鼠大脑的高质量RNA的实时分析”）。

原理

RNeasy Plus通用微型程序可从任何类型的组织中纯化RNA，包括脂肪组织或难裂解组织。RNeasy Plus Universal Mini Kit 集成了基于苯酚/胍的样品裂解和总RNA的硅胶膜纯化。试剂盒中包含的QIAzol裂解试剂是苯酚和硫氰酸胍的单相溶液，旨在促进各种组织的裂解并抑制RNA酶。通过有机相萃取的高效裂解和随后的污染物去除使得能够使用具有RNeasy旋转柱的大量组织。gDNA去除剂溶液有效去除基因组DNA污染，并显著改善DNA进入间期的分离。

RNeasy 96通用组织程序能够从任何动物或人类组织样品中高通量纯化RNA。与标准硅胶膜程序相比，RNeasy Plus Universal Mini Kit 为所有组织类型提供了更高的总RNA产量。RNeasy程序丰富了长度大于200个碱基的RNA，提供的总RNA产量不包括5.8S rRNA、tRNA和其他低分子量RNA，这些RNA占细胞总RNA的15–20%。

步骤

RNeasy Plus通用程序易于遵循，与使用苯酚/氯仿提取总RNA的后续清理程序相比，RNeasy Plus通用程序速度更快、效率更高，RNA纯度和产量更好（见流程图“RNeasy Plus Universal Mini程序”）。使用RNeasy Plus Universal Mini Kit 从高达50 mg的组织中纯化总RNA。

使用TissueRuptor II、TissueLyser LT或TissueLyser II在QIAzol裂解试剂中均化组织样品。加入gDNA去除剂溶液和氯仿后，通过离心将匀浆分离为水相和有机相。收集含有RNA的上层水相，与乙醇混合，并使用RNeasy旋转柱纯化RNA。总RNA结合到旋转柱膜上，苯酚和其他污染物被有效地洗掉。高质量RNA在不含RNA酶的水中洗脱。

由于大多数小于200个核苷酸的RNA（如rRNA和tRNA）被排除，该程序提供了mRNA的富集。RNeasy Plus通用程序可以修改，以允许从培养细胞中纯化含有小RNA（如miRNA）的总RNA。

优化的RNeasy 96通用组织程序将TissueLyser/QIAzol处理与RNeasy 1996纯化结合在一个易于遵循的方案中（见流程图“RNeasy 96Universal Tissue程序”）。使用TissueLyser II的高效高通量破坏提供了平行破坏和均匀化，在QIAzol裂解试剂中裂解多达192个样品。协议步骤使用QIAGEN 96孔板离心系统手动执行，可选使用QIAvac 96 vacuum manifold。

应用

使用RNeasy Plus Universal Kits 纯化的RNA非常适合于对少量DNA污染敏感的下游应用，如RNA-seq、定量实时RT-PCR。纯化的RNA也可用于其他应用。

QIAzol和RNeasy技术的结合产生了无酚携带的高纯度RNA。使用RNeasy 96 Universal Tissue Kit纯化的RNA适用于所有下游应用，包括RNA序列、实时RT-PCR和阵列分析。

RNeasy Universal Kits的比较