产品简介

TIANSeq DirectFast Library Kit(Illumina) 是专门针对于Illumina 高通量测序平台所优化的 DNA 文库构建试剂盒。本试剂盒实现了 DNA 片段化、末端修复和 3’端 dA 尾添加在一管内一步法完成，同时所得产物无需纯化，可直接用于 adapter 的连接。另外，本试剂盒配备的 PCR 扩增试剂经过专门的优化，扩增所得 DNA 序列产量高，保真度好、无碱基偏好性。本产品采用一步法的反应流程，省去了多步纯化步骤，整个建库流程仅需 2.5 hr；文库转化效率更高，可对微量 DNA 样本进行高效的文库构建。

产品特点

■ DNA 片段化过程和 PCR 富集过程无明显碱基偏好性，测序均一度好。

■ 高文库转化效率， DNA 样本起始量可低至 1 ng。

■ 一管式酶促反应，操作简便，省去多步纯化步骤，整个建库流程仅需 2.5 h。

适用范围

适用于 Illumina 高通量测序平台 DNA 文库构建。

适用样本量

1 ng ～ 1 µg DNA

自备试剂

1. TIANSeq Single-Indexed Adapter(Illumina® Platforms)(Cat# NG214)。
2. TIANSeq DNA 片段分选磁珠 (Cat# NG316)

文库构建流程

实验结果

灵活的上样量和片段处理长度

图1. 不同反应时间对DNA 片段化效果

使用“TIANSeq DirectFast DNA Library Prep Kit” 对10 ng 和1000 ng DNA 进行片段化处理。处理不同时长的反应产物经1.8× 磁珠进行纯化后用于Angilent 2100 分析。

片段化酶与机械片段化效果比较

图2. 不同文库制备方案基因组覆盖的对比结果，三种不同GC 含量细菌基因组DNA 等摩尔混合，100 ng 混合DNA 经不同方案制备文库测序后比较基因组覆盖度。结果表明：FEA Module（NG301) 对DNA 的片段化效果与超声破碎高度一致，均不存在碱基偏好性。

样本低至1ng建库效果比较

图3. 不同文库制备方案基因组覆盖的对比结果，三种不同GC 含量细菌基因组DNA 等摩尔混合，1 ng 混合DNA 经不同方案制备文库测序后比较基因组覆盖度。结果表明：即使低至1 ng 的DNA 上样量，FEA Module（NG301) 的片段化效果仍然与 超声破碎方法高度一致，没有碱基偏好性。

采用PCR free步骤测序结果比较

图4. 不同初始量的基因组DNA 使用PCR 或PCR free 的方式进行文库构建，最终的基因组覆盖对比对。结果表明：使用Fragmentation Module (NG301)试剂及一管式操作和高效的文库构建步骤，无论是否进行PCR 富集，所得到的DNA 文库在片段覆盖度分布方面均与机械破碎方法保持高度一致。

文库构建效率与得率统计

图5. 不同起始量样本(1、10、25、50、100、500、1000 ng) 进行文库构建后，使用qPCR 对得到的文库DNA 进行定量分析结果。线性回归分析表明在广泛的上样量范围内，文库得率均呈良好的线性关系。即使在上样量低至1 ng 的情况下，文库构建效率也不会降低。