产品简介

本产品为RNase-Free的DNase I，呈干粉状；在某些情况下，盛有DNase I干粉的瓶子看起来是空的，这是由于干粉形成一层薄膜，粘在瓶壁上的缘故。为了避免在溶解DNase I的过程中造成损失，请不要打开瓶盖。使用RNase-Free注射器将RNase-Free ddH2O注射进瓶中，颠倒混匀使DNase I完全溶解后，使用RNase-Free注射器吸出溶液（RNaseFree注射器需自备，也可将RNase-FreeddH2O直接加入瓶中，此时请小心打开瓶盖，防止DNase I损失）。

溶解后的DNase I溶液中可能会出现不溶物，这在DNase I干粉的生产制作中是正常的现象，对DNase I的活性和生化指标没有影响。

在配制DNase I溶液的时候请不要涡旋振荡，应轻柔的颠倒混匀。

本品能有效去除DNA，并可与TIANGEN公司RNAprep Pure系列试剂盒配套使用。

本品既可用于离心柱吸附法提纯RNA （例如RNAprep Pure系列）中DNA的消化，也可直接用于RNA溶液中DNA的消化。

储存条件

RNase-Free DNase I干粉可在室温（15-25℃）运输，在2-8℃可储存1年。

操作步骤

一、与TIANGEN公司RNAprep Pure系列试剂盒配套使用（上柱过程）

本试剂盒提供的特殊Buffer RDD，能够与离心柱型RNA提取试剂盒配套使用，在上柱吸附的过程中有效去除DNA，且DNase I会在随后的洗脱过程中去除（以下操作步骤是与RNAprep Pure系列试剂盒配套使用的，其中的缓冲液RW1为RNAprep Pure系列试剂盒提供）。

注意：普通的DNase Buffer可能并不适用于上柱吸附的过程中消化DNA，使用其他的缓冲液可能会影响RNA和膜的结合，导致RNA产量的降低。

1. DNase I储存液的配制： 将DNase I干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月），每次按照实验需求取出。请注意将融化的DNase I的储存液置于4℃储存（可保存6周），请勿再次冻存。

2. DNase I 工作液的配制：每个反应取10 μl DNase I 储存液，加入70 μl Buffer RDD，轻柔混匀。

3. 接RNAprep Pure系列试剂盒如下的操作步骤， 向已经结合RNA的吸附柱中加入350 μl 缓冲液RW1， 12,000 rpm (~13,400×g )离心30-60 sec，弃废液。

4. 向吸附柱中央加入第2 步配好的80 μl DNase I 工作液，室温放置15 min。

5. 接RNAprep Pure系列试剂盒如下步骤，向吸附柱中加入350 μl 缓冲液RW1， 12,000rpm (~13,400×g )离心30-60 sec，弃废液。继续按照RNAprep Pure系列试剂盒操作步骤，直至最终洗脱RNA分子。

注意：后续实验请按照RNAprep Pure系列说明书继续进行。

二、直接处理RNA溶液

1. DNase I储存液的配制： 将DNase I干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月），每次按照实验需求取出。请注意将融化的DNase I的储存液置于4℃储存（可保存6周），请勿再次冻存。

2. 在RNase-Free的离心管中建立如下反应体系：≤87.5 µl RNA溶液10 µl Buffer RDD2.5 µl DNase I储存液用RNase-Free ddH2O补充体系至100 µl。

3. 20-25℃孵育10 min。

4. 纯化RNA，可使用TIANGEN提供的RNAclean Kit （DP412）。

注意：由于处理完的RNA中引入了DNase I及不同浓度盐离子，可能对后续的实验造成影响，为确保下一步操作顺利进行，建议使用过柱纯化的方法对RNA进行纯化操作。如只需对DNase I进行简单的失活处理，可在第3步处理完后向体系中加入10 µl StopSolution (20 mM EDTA, pH8.0)，65℃孵育10 min失活DNase I。

三、与TIANGEN公司磁珠法RNA提取产品配套使用注意：

TIANGEN磁珠法RNA提取产品DNase I消化基因组DNA的反应体系，请参照对应产品的具体操作步骤。