特点

•     · 纯化得到相当于2次CsCl梯度离心得到的DNA纯度
•     · 高产量质粒DNA
•     · 经济的制备方法
•     · 使用LyseBlue，获得最佳的裂解效果和最大的DNA产量
•     · 适合多种应用

产品详情

QIAGEN Plasmid Kits应用重力流阴离子交换柱纯化转染级质粒DNA。该试剂盒可纯化获得至多2.5 mg的质粒DNA。离心获得澄清的裂解产物和异丙醇沉淀。

转染效率与质粒纯化方法。

采用不同方法制备pRSVcat DNA，通过脂质体介导的转染将其导入指定的细胞系内，40小时后测定CAT表达水平，确定转染效率。每个柱形代表4个独立的转录的平均值（2个质粒制备物分别转染2次）。使用QIAGEN Plasmid Kit可获得最高的转染效率。

QIAGEN Plasmid Kit实验方案。

将中性细菌裂解物直接置于QIAfilter Cartridge内孵育，数秒内即可过滤澄清。然后将澄清的裂解物上样至阴离子交换纯化柱，在适当的低盐和pH条件下，质粒DNA会选择性地结合上去。利用中盐浓度的洗涤液去除RNA、蛋白质、代谢物及其他低分子量杂质，使用高盐缓冲液洗脱超纯的质粒DNA。利用异丙醇沉淀对DNA进行浓缩并脱盐，并通过离心收集。

性能

QIAGEN Plasmid Mega Kits利用重力流QIAGEN-tip 2500阴离子交换柱高效纯化质粒DNA。只需500 ml–2.5 L培养基，即可纯化获得多达2.5 mg高拷贝质粒DNA。（培养容量取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌株和培养基。）QIAGEN Plasmid Kits纯化的质粒DNA适合多种应用，如：转染、克隆和体外转录。

原理

QIAGEN-tips内独特的阴离子交换树脂专为纯化核酸设计。它独特的分离特性，使纯化的DNA的纯度相当于连续2次CsCl梯度离心得到的DNA纯度。预装的QIAGEN-tips利用重力流原理工作，缩短了纯化质粒的手动操作时间。整套QIAGEN质粒纯化体系避免使用苯酚、氯仿、溴化乙锭和CsCl等有毒物质，减小对使用者和环境的危害。

操作流程

使用QIAGEN Plasmid Kits，细菌裂解物通过离心澄清。澄清后的裂解物上样到阴离子交换柱，质粒DNA在适当的低盐条件和pH条件下与树脂进行选择性结合。RNA、蛋白质、代谢产物和和其它低分子量杂质用中盐洗涤液去除，用高盐缓冲液洗脱纯质粒DNA。纯化得到的DNA用异丙醇沉淀浓缩和脱盐后，离心收集。

应用

QIAGEN Plasmid Kits纯化得到的质粒DNA适合多种应用，如：

•     · 转染

•     · 克隆
•     · PCR

•     · 体外转录

参数