产品简介
PK(EC 2.7.1.40)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化糖酵解过程中的最后一步反应,是糖酵解过程中的主要限速酶之一,也是产生ATP的关键酶之一,因此测定PK活性具有重要意义。PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映PK活性。
溶液的配制
1、 试剂二 A:临用前加入 1.2mL 蒸馏水,用不完的试剂可-20℃分装保存 4 周,避免反复冻融;
2、 试剂二 B:临用前取 1 支加入 0.645mL 蒸馏水,用不完的试剂可-20℃分装保存 4 周,避免反复冻融;
3、 试剂二 C:临用前加入 1.2mL 蒸馏水,用不完的试剂可-20℃分装保存 4 周,避免反复冻融;
4、 工作液的配制:根据样本按试剂一:试剂二 A:试剂二 B:试剂二 C= 750μL:50μL:50μL:50μL(5T)的比例配制,现用现配;
5、 试剂三:临用前根据用量按照试剂三:蒸馏水=5μL:295μL(30T)的比例充分混匀,冰上放置备用,现用现配。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
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