产品描述

细胞凋亡是胚胎发育过程中发生的正常生理过程，也是维持组织内环境稳定的过程。凋亡程序以某些形态学特征为特征，包括质膜不对称性和附着性的丧失、细胞质和细胞核的浓缩以及DNA的核小体间裂解。质膜丢失是最早的特征之一。在凋亡细胞中，膜磷脂磷脂酰丝氨酸（PS）从质膜内小叶转移到质膜外小叶，从而将PS暴露于外部细胞环境中。膜联蛋白V是一种35-36 kDa Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与PS具有高亲和力，并与暴露PS的细胞结合。膜联蛋白Ⅴ可与荧光色素结合，包括藻红蛋白（PE）。这种格式保留了其对PS的高亲和力，因此可作为流式细胞术分析凋亡细胞的敏感探针。由于PS的外化发生在细胞凋亡的早期阶段，因此PE Annexin V染色可以比基于DNA片段等核变化的分析更早地识别细胞凋亡。

PE Annexin V染色先于膜完整性的丧失，伴随着凋亡或坏死过程导致的细胞死亡的最新阶段。因此，PE Annexin V染色通常与活性染料（如7-氨基-放线菌素（7-AAD））结合使用，以便研究人员识别早期凋亡细胞（7-AAD-阴性，PE Annexin V阳性）。具有完整膜的活细胞不含7-AAD，而死亡和受损细胞的膜可渗透7-AAD。例如，被认为可行的细胞是PE Annexin V和7-AAD阴性细胞；早期凋亡的细胞为PE-Annexin V阳性和7-AAD阴性；晚期凋亡或已经死亡的细胞均为PE Annexin V和7-AAD阳性。该分析无法区分凋亡死亡的细胞与坏死途径导致死亡的细胞，因为在任何一种情况下，死亡细胞都会被PE Annexin V和7-AAD染色。然而，随着时间的推移，当检测到细胞凋亡时，通常可以从PE Annexin V和7-AAD阴性（存活或无可测量的凋亡），到PE Annessin V阳性和7-AAD-阴性（早期凋亡，存在膜完整性），最后到PE Angenin V和7-2AAD阳性（终末期凋亡和死亡）。细胞在这三个阶段的运动表明细胞凋亡。相比之下，单次观察表明，细胞本身PE Annexin V和7-AAD均呈阳性，但有关细胞死亡过程的信息较少。

准备和存储

在4°C下储存未稀释的溶液，并避免长期暴露在阳光下。不要冻结。

推荐的实验流程

PE Annexin V是一种识别凋亡细胞的敏感探针，与带负电荷的磷脂表面（Kd为5 x 10^-2）结合，与大多数其他磷脂相比，对磷脂酰丝氨酸（PS）的亲和力更高。PE Annexin V结合是钙依赖性的，如PE Annessin V染色方案所述，最佳染色需要规定的钙和盐浓度。研究人员应注意，对粘附细胞类型（如HeLa、NIH 3T3等）的PE Annexin V流式细胞术分析没有进行常规检测，因为细胞分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤。然而，以前曾报道过利用Annexin V对粘附细胞类型进行流式细胞术的方法（Casiola Rosen等人和van Engelend等人）。