储存条件
RT,有效期24个月。
自备试剂
蛋白酶K溶液(10mg/mL) ,异丙醇,70% 乙醇,TE或者水都可以。
裂解液准备
每mL 裂解液中加入40uL的蛋白酶K溶液(10mg/mL)。
裂解步骤
1:剪切鼠尾,尽量剪碎;
2:加入750uL的裂解液(确认已经加入蛋白酶K);
3:55℃ 至少保温 3h以上(每隔一小时震荡10s),或者直接55℃保温20h(可以过夜,或者放48小时都可以)。
4: 70℃ 保存5min,冰上放置5min
纯化步骤方法一(沉淀法):
1: 12000rmp/min离心10min ,取上清(上清中含DNA);
2: 将上清加入等体积(720uL)的异丙醇中;
3: 颠倒混匀,-20℃放置 15-30min;
4: 12000rmp/min 离心 10-20min。小心吸弃上清(沉淀中含DNA);
5:用 70%乙醇冲洗管壁(0.5-10mL),12000rmp/min离心10min ,小心吸弃上清;
6:自然干燥或者吹风机吹干后,加入50uL TE (TE可以65℃ 预热后加入)溶解沉淀;
7:所得DNA可直接作为PCR的模板使用。
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