产品简介
高密度脂蛋白(High-Density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C)是血清脂蛋白中密度最大、颗粒最小的脂蛋白,主要作用为将周围组织的胆固醇运送到肝脏进行降解。众多流行病学研究表明,HDL-C水平与动脉粥样硬化(AS)、冠心病(GHD)呈负相关,对于临床诊断动脉粥硬化、冠心病、高血压等疾病有重要参考价值。
使用选择性沉淀剂将HDL-C特异性分离出来,利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇(FC)和游离脂肪酸(FFA),从而把胆固醇酯转化为FC;进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化,生成4-胆甾烯酮和H2O2;最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和苯胺类似物,生成紫色化合物,其在546nm有特征吸收峰,其颜色深浅与HDL-C含量成正比。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
溶液的配制
1. 提取液一:自备异丙醇。
2. 提取液二:临用前根据样本量将提取液二 A:提取液二 B=100μL:100μL(约 1T)的比例配制提取液二,当 天用完。
3. 试剂一:临用前取 1 瓶试剂一 A 加入 35mL 试剂一 B 充分溶解,2-8℃可以保存 2 周。
4. 试剂三:液体置于试剂瓶内 EP 管中。
5. 标准品:10 mg 胆固醇,临用前加入 517 μL 提取液一,振荡溶解,即为 50 μmol/mL 的胆固醇标准溶液。
6. 工作液的配制:根据样本量将试剂一:试剂二:试剂三按 9mL:60μL:9μL(约 10T)的比例配制工作液, 现用现配。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、天平、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、 可调式移液枪、冰、蒸馏水、异丙醇。
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