■ 制品内容 (100 次量*1) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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*3:【Positive Control RNA】 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kbp的pBR322来源的DNA片段,其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有Poly(A)+ 尾的RNA。当把Control RNA经RT-PCR合成的双链cDNA插入质粒时,该质粒便可获得四环素抗性。Control RNA简图见图1。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
图1. Positive Control RNA:使用各种引物所能扩增的DNA片段 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 制品说明 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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■ 保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
-20℃。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 特点 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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■ 使用注意 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1. 当同时需要进行多个反转录反应或PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液 (其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等),然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。 2. 使用Reverse Transcriptase (AMV)、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 等试剂时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。 3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出,使用后也应立即放回-20℃中保存。 4. 分装试剂时务必使用新的枪头,以防止样品间污染。 5. PCR反应条件 最适的PCR条件因PCR扩增仪的不同而不同,建议在进行样品实验前先试做一下Control实验。 6. 引物选择 用于反转录的引物可视实验具体情况选择Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特异性下游引物。对于不具有Hairpin构造的短链mRNA,3种引物中的任何一种都可以使用,但一般应按以下方法进行选择。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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