Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，对细胞的毒性较低,常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测,也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

Hoechst 33342的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33342和双链DNA结合后，最大激发波长为350nm，最大发射波长为461nm。

本产品可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

1. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。

2. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

若发现染色后荧光太强，可将原染色液用PBS做适当稀释后再使用。

1.对于固定的细胞或组织：

a.对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。

b.对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

c. 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d.直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞

的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2. 对于活细胞或培养的组织：

a. 加入适当量Hoechst 33342染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。

b. 在适宜于细胞培养的温度培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。细胞发生凋亡时，在荧光显微镜下观察会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。