植物材料的固定、包埋和制片（仅供参考）

一、植物材料的固定和包埋

  在此过程应注意避免Rnase的污染。所使用的熔蜡管（管盖高压湿热灭菌）、烧杯、量筒和药勺均需180℃烘5小时以上。所用蒸馏水无需用DEPC处理。所固定的材料越小越好，尽可能切除多余的材料。切割后应立即固定。取材后若不能立即固定，则应置于冰上运输。配试剂前请计算一下所需用量，用多少配多少，节约试剂。

二、载玻片和盖玻片的处理

1、洗液浸泡过夜，流水冲洗干净。

2、在染色缸中用硝酸处理30分钟，回收硝酸，不断换蒸馏水冲洗载玻片至少1个小时以上（一般换蒸馏水六次，每次间隔10分钟）。晾干。

3、用丙酮处理15分钟，通风橱中晾干，用锡箔纸包裹。

4、180℃烘5个小时。

5、待载玻片冷却，加3.5 ul多聚-L-赖氨酸（1mg/ml）于一端。用盖玻片（已经过180℃烘5个小时处理）的一边接触液滴，进行涂片。涂片时应观察到“虹膜”的形成。

  注意：若涂片后多聚-L-赖氨酸不形成一层水膜，则表明载玻片没有洗干净，必须重洗。请注意标记载玻片的哪一面涂有多聚-L-赖氨酸。

6、涂片之后放入42℃的烫板中干燥过夜（最短可以2小时），然后放入切片盒中，经过处理的载玻片应在一周内使用。

7、盖玻片的处理：用丙酮处理15分钟，通风橱中晾干，用锡箔纸包裹。180℃烘5个小时。

8、 最后封片用的盖玻片不需作任何处理。使用前用擦镜纸擦净即可（主要是防尘）。

三、切片和展片

1、修块。将包有材料的小蜡块（包含一个材料）初步修成六面体，粘在硬木块上。用刀片将蜡块修成梯形，在材料的周围各留2mm的石蜡即可（尽可能少留）。

2、切片。切片的厚度为7-10 um。在解剖镜下用暗视野观察蜡带，以决定取舍。

3、展片。将DEPC处理过的蒸馏水滴加在涂有多聚赖氨酸的载玻片上（注意分清哪一面涂有多聚赖氨酸），将蜡带的反面（注意正反面！）漂浮于其上放入烫板上（42℃）进行展片。蜡带完全展开后（数分钟至几十分钟不等，注意观察以免展过头，以组织不裂开为度），吸去多余的水，用一张镜头纸轻轻压在蜡带上，然后用吸水纸吸去多余的水。置于42℃烫板上干燥过夜。

4、制好的片子应在一星期内进行杂交。