超声裂解缓冲液（大量提取）

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货号：SL1036

品牌：Coolaber

存储条件：2-8℃

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SL1036-100mL	100 mL	瓶	¥98.00	请登录	请登录
SL1036-500mL	500 mL	瓶	¥298.00	请登录	请登录

产品说明

原核蛋白表达纯化实验中，首先需要对大肠杆菌进行裂解。常用的方法有超声破碎，溶菌酶酶解等。本产品提供超声裂解时的缓冲液。

保存条件

2-8℃保存，PMSF 溶液-20℃保存，保质期 1 年。

使用说明

1.临用前，每10mL的超声裂解缓冲液中，加入60μL-120μL的100mM的PMSF溶液。

2.离心富集菌体。 4℃ 4,000g离心20min或4℃ 15,000g离心1min，弃上清，收集沉淀。随后即可进入细菌裂解步骤，也可以在-20℃或-80℃冻存备用。冷冻保存的菌体使用前需置于冰上解冻15min。

3.对于新鲜的或解冻的细菌沉淀，按照每克细菌沉淀湿重加入2-5mL超声裂解缓冲液的比例加入超声裂解缓冲液，充分重悬菌体。

4.冰上超声裂解细菌。超声功率200-300W，每次超声处理10s，每次间隔10s，共超声处理6次。

注：具体超声处理的方式需根据特定型号的超声仪器自行摸索和优化。

5.(可选做)如果超声处理后裂解液非常粘稠，可以加入RNase A至10μg/mL及 DNase I至5μg/mL，冰上放置10-15min。或者也可以使用适当的装好了较细针头的注射器，反复抽吸数次，以剪切粘稠的基因组DNA等。

6.4℃ 10,000g离心20-30min，收集细菌裂解液上清并置于冰水浴或冰上。可以取 20μl上清留作后续检测用。

注：上清必须保持澄清，即不含任何不溶物，才能进行下一步的纯化。上清中如果混有不溶性杂质会严重影响后续纯化获得蛋白的纯度。

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