产品简介

M9-SeMET高表达培养基(M9 SeMET High-Yield Medium)是一种合成培养基，用于大肠杆菌达硒代甲硫氨酸标记的蛋白质(Seleno-Methionine labeled protein)，以制备蛋白晶体。
本配方适合非氨基酸缺陷型大肠杆菌，对于营养缺陷型大肠杆菌菌株，需要添加对应成分到培养基中。

实验方法

SeMet是有毒的。培养基上清液应该集中起来当做有害物质处理。废液瓶中液面到肩处，不要到瓶口处。标记好有害物标签。参考实验室标准操作流程，正确使用SeMet。最低安全措施，操作人员需要合适的个人防护装置，包括丁腈橡胶手套、实验服、全覆盖的鞋。

接种：
早晨，将甘油菌或单克隆接种到2-5ml LB培养基中，培养至下午4、5点钟。
离心菌液，丢弃上清液，收集菌体细胞。
将菌体接种到50ml或100ml M9基础培养基中，37ºC过夜培养。提前一天将M9基础培养基过夜预热和预通气，能够极大的加快起始生长速度。

接种过夜培养物
取20ml过夜培养的菌液接种到1L M9基础培养基中，37ºC培养。
直到DO600值达到0.5~0.6。一般来说需要大约10h。
加入氨基酸混合物，以抑制甲硫氨酸合成，提供硒代甲硫氨酸合成用底物。再继续培养15min。

诱导、表达、收集
接下来的流程与普通蛋白表达流程相同。例如以25ºC作为表达温度。
在加入混合氨基酸15min后，将温度降至25ºC。
10min后加入IPTG ，工作浓度为1 mM/L。
过夜表达（一般为16-18h）。