产品简介

大肠杆菌自诱导培养基用于大肠杆菌Lac启动子驱动的的重组蛋白表达，无需添加IPTG。自诱导培养基能够获得高细胞密度，蛋白表达率高出IPTG诱导过程好几倍。

工作原理

肉汤培养基是一种加富培养基，配方基于TB培养基（Terrific Broth），后者由LB培养基改进而来，目的是达到高细胞密度。E. coli在该培养基中生长速度快于其在LB培养基或 2x YT肉汤中的生长速度。SB培养基被认为是最佳的质粒扩增培养基。一般来说，在液体培养基中大肠杆菌细胞生长的质量如下：LB Broth < 2x YT Broth < Terrific Broth < Super Broth。该培养基中含有理想比例的葡萄糖和α-乳糖作为碳源和能量来源。胰蛋白胨提供氮源、维生素、矿物质和氨基酸，这些营养成分是细胞生长所必需的。酵母提取物是丰富的B族维生素来源。Studier salts为细菌细胞的生长提供最佳的生理环境。通常，外源蛋白在细菌中表达时常使用IPTG诱导的启动子，如Lac启动子。当细胞密度达到理想值时，通过向培养基中加入IPTG的方法诱导蛋白表达。使用这个自动诱导培养基，不再需要监测细胞密度和添加IPTG。葡萄糖作为半乳糖操纵子的阻遏因子阻止细菌利用α-乳糖，而被优先代谢，促进高密度生长。一旦培养基中的葡萄糖被耗尽（通常发生在对数期的后期），乳糖被ß-半乳糖苷酶转换成异乳糖（葡萄糖-1,6-半乳糖），而后者作为IPTG诱导型启动子的诱导剂，引起乳糖阻遏子从与DNA结合的位点上释放，启动重组蛋白的表达。对于DE3基因型的E.coli中，异乳糖使T7lac启动子去阻遏，并诱导lacUV5启动子表达T7 RNA聚合酶。通过这种方式，在细菌培养物生长到某一特定点时蛋白表达自发开始，去掉了监测细胞密度（OD600）和添加IPTG这两个步骤。与传统IPTG诱导的蛋白表达过程相比，使用自动诱导培养基极大地方便和简化了试验流程。

配制方法

1. 称取48g脱水培养基粉末，加入25ml甘油，用1L去离子水加热溶解。

2. 煮沸1min。

3. 115°C 灭菌20min。

不要过度加热，避免乳糖分解和培养基颜色加深。冷却后保存在2-8ºC，如果不染菌，可以保存2个月左右。