产品简介

Coolaber动物基因组DNA快速提取试剂盒不含巯基乙醇等刺激性试剂，安全无毒。主要用于提取新鲜或者冷冻的动物组织中的基因组DNA。提取的DNA OD260/280 一般在 1.8 -1.9之间，纯度高，不含污染和抑制剂，可以直接用于PCR、酶切、杂交等后续实验。

注意事项

1.裂解液I 和纯化液II 容易产生沉淀，纯化液II 比较粘稠，用前均需要放置在 65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。

2. 自备试剂：氯仿。

操作步骤

（一）样品裂解：

1. 贴壁细胞

吸尽培养液，在每 10 cm2细胞中加入 0.8 mL 预热的裂解液I ，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解，然后把裂解液转移到 1.5 mL 离心管中。

2. 悬浮细胞

离心收集细胞，吸尽液体，在每 1-5×106悬浮细胞中加入 0.8 mL预热的裂解液I，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到 1.5 mL 离心管中。如果是 fibroblasts 或 carcinoma 细胞，细胞使用量不要超过 1×106 个细胞。

3. 新鲜或冷冻的组织

a. 匀浆处理： 将剪切成小块的新鲜或冷冻保存的组织放入 10 mL 或 15 mL 离心管中，每 50-100 mg 组织加 0.8 mL 预热的裂解液I，用剪切式匀浆器匀浆 30 s左右，然后把裂解液转移到 1.5 mL 离心管中。

b. 液氮研磨： 称取动物组织 50-100 mg ，剪成小块，液氮研磨成粉后，加入已加入0.8 mL裂解液I 的1.5 mL的离心管中。

c. 对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的 DNA），建议组织的使用量不要超过 50 mg。

（二）样品纯化：

1. 在步骤（一）所得的约0.8 mL的裂解产物中加入 0.4 mL预热的纯化液II，颠倒数次混匀。（由于纯化液II 比较粘稠，可以将 1 mL 枪头剪去一截再吸取）。

2. 65℃水浴 5-10 min。如果室温放置，DNA 产量会降低 10-20%。

3. 加入 200 uL 自备氯仿，震荡混匀 10-30 秒。

4. 12,000 rpm 室温离心 2 分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的 1.5 mL 离心管中，避免触及中间层的白膜。

（三）基因组DNA收集：

1. 将步骤（二）所得的上清转移到5 mL或者10 mL的离心管中，加入1.5倍体积的结合液III，颠倒数次混匀后，分多次上同一DNA吸附柱，每次上柱后均先室温放置 2 min，然后 12,000 rpm 离心 1 min，弃穿透液。(也可将上清平均转移到两个1.5 mL离心管中，分别加入1.5倍体积的结合液III )

2. 在吸附柱中加入500 μL洗涤液，12,000 rpm离心1 min，弃穿透液；重复洗涤一次。

3. 再将吸附柱12,000 rpm离心30 s以甩干乙醇。

4. 将吸附柱放入一个干净的1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL洗脱液（65-70℃预热），室温静置2 min。12,000 rpm离心1 min。将穿透液重新加入吸附柱中央，12,000 rpm离心1 min以洗脱更多基因组DNA。

5. 检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20ºC冰箱。