产品简介

乙酰辅酶A广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物，在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶A汇聚成一条共同的代谢通路-三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于ATP合成。此外，乙酰辅酶A是合成脂肪酸、酮体、胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。

苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和NAD+生成草酰乙酸和NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶A含量和NADH的生成速率成正比，340nm 下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶A含量的高低。

溶液的配制

25T 溶液的配制：

1、 试剂一：临用前取 1 支先将液体甩离至管底，然后加入 250μL 试剂四，充分溶解；用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；

2、 试剂二：临用前取 1 支先将液体甩离至管底，然后加入 250μL 试剂四，充分溶解；用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；

3、 试剂三：临用取试剂三 B 加入 24mL 试剂三 A，充分溶解；用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；

4、 工作液：临用前将试剂一、二和三按照 1:1:90 的比例混合，根据样本量现配现用。

50T 溶液的配制：

1、 试剂一：临用前取 1 支先将液体甩离至管底，然后加入 250 μL 试剂四，充分溶解；用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；

2、 试剂二：临用前取 1 支先将液体甩离至管底，然后加入 250 μL 试剂四，充分溶解；用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；

3、 试剂三：临用前取 1 瓶试剂三 B 加入 24 mL 试剂三 A，充分溶解；用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；

4、 工作液：临用前将试剂一、二和三按照 1:1:90 的比例混合，根据样本量现配现用。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计、天平、水浴锅/恒温培养箱、台式低温离心机、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。