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特点
- · 灵敏的一步纯化His-tagged蛋白
- · 高产量制备高纯度蛋白，至多50 mg/ml
- · 纯化过程快速方便，实验结果重复性高，适用于任何LC体系
产品详情
Ni-NTA Superflow作为His-tagged蛋白纯化引用应用较多的树脂，目前提供1 ml和5 ml两种规格的预装柱，可用于液相色谱系统进行自动纯化，如FPLC、ÄkTA和BioLogic Systems，也可以使用注射器进行手动纯化。
性能
Ni-NTA相较于其他树脂而言，在提供高产量高纯度的蛋白质方面，有优异的表现。Ni-NTA Superflow镍离子脱落率最低。而镍离子脱落会使其余带电的配体作为离子交换并结合非标记的蛋白，将污染洗脱组分。Ni-NTA耐受性强，甚至可在10 mM DTT存在的情况下纯化得到高纯度活性蛋白。
如下表所示，Ni-NTA产品在各个纯度规模都能获得高纯度蛋白Ni-NTA Superflow Cartridges式QIAGEN提供的His-tagged蛋白纯化解决方案中的一部分。
| 模型 | 模型体积 | 培养液体积 | 产量 | 恢复率（%） | 纯度* |
|---|---|---|---|---|---|
| Ni-NTA Magnetic Agarose Beads （微型规模） | 100 μl | 1 ml | 33 μg | ~90% | ~97% |
| Ni-NTA Superflow （小规模） | 500 μl | 320 ml | 6 mg | ~80% | ~96% |
| Ni-NTA Superflow （中等规模） | 10 ml | 1.7 l | 109 mg | ~80% | ~98% |
| Ni-NTA Superflow （大规模） | 100 ml | 18 l | 2 g | >88% | ~97% |
*使用Agilent Bioanalyzer确定（Protein 50 LabChip Kit）
原理
Ni-NTA基质应用亲和层析法纯化His-tagged蛋白。Ni-NTA稳定性高，可以兼容缓冲剂组分，包括强变性剂、清洁剂甚至还原剂（见下表Reagents compatible with the His/Ni-NTA interaction）。这种灵活性使得研究人员可设计出最佳的纯化方案，同时受益于Ni-NTA卓越的分离特性，通常无需第二次纯化。
| 变性剂 | 清洁剂 | 还原剂 | 其他 | 盐 | 长期储存 |
|---|---|---|---|---|---|
| 6 M Gu·HCl | 2% Triton X-100 | 20 mM β-ME | 50%甘油 | 4 M MgCl2 | 至多30%乙醇 |
| 8 M尿素 | 2% Tween 20 | 10 mM DTT | 20%乙醇 | 5 mM CaCl2 | 或者100 mM NaOH |
| 1% CHAPS | 20 mM TCEP 20 mM | 20 mM TCEP | 20 mM咪唑 | 2 M NaCl |
操作流程
应用灵敏的Superflow基质，流速可高达10 ml/min（1 ml预装柱）和40 ml/min（5 ml预装柱），有助于加快纯化过程，同时提高通量。预装柱可快速、简单的连接到液相层析系统或手动纯化的注射器上。纯化过程具有高度可重复性，确保之后可制备同样高品质的蛋白质。
应用
Ni-NTA基质可用于大规模His-tagged蛋白，以进行结构研究（如，蛋白结晶或NMR）、或者制备大量（克级）的生物医药产品。
参数
| Features | Specifications |
| Applications | Proteomics |
| Gravity flow or spin column | FPLC or syringe |
| Binding capacity | Up to 50 mg/ml |
| FPLC | Yes |
| N- or C-terminal tag | Both |
| Bead size | 60-160 µm |
| Processing | Manual/Automated |
| Scale | Large scale |
| Start material | Cell lysate |
| Support/matrix | Superflow |
| Tag | 6xHis tag |
| Yield | Up to 50 mg (1 ml cartridge), up to 250 mg (5 ml cartridge) |
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